本文關(guān)鍵詞：梨小食心蟲氣味結(jié)合蛋白GmolOBP1和GmolOBP6的克隆、表達(dá)及功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：昆蟲通過化學(xué)感器實(shí)現(xiàn)化學(xué)通訊,完成定位寄主植物和產(chǎn)卵場所,選擇配偶和躲避天敵。昆蟲借助味覺感器和嗅覺感器識別環(huán)境中的氣味分子,其中以嗅覺感器研究較為清楚。嗅覺識別過程涉及一系列蛋白的參與,包括氣味結(jié)合蛋白、氣味受體、感覺神經(jīng)元膜蛋白、氣味降解酶和離子型受體。氣味結(jié)合蛋白作為氣味識別的起始蛋白,對昆蟲生理和行為反應(yīng)作用重大,明確其與氣味分子的識別機(jī)制有助于更好的闡釋梨小食心蟲的化學(xué)通訊機(jī)制。本研究從梨小食心蟲Grapholita molesta(Busck)觸角轉(zhuǎn)錄本中篩選出2條氣味結(jié)合蛋白基因GmolOBP1和GmolOBP6,對其進(jìn)行基因克隆、原核表達(dá)、蛋白純化及功能研究,并對3日齡成蟲觸角進(jìn)行觸角電位反應(yīng)。實(shí)驗結(jié)果表明:GmolOBP1和GmolOBP6開放閱讀框長度分別為468和483 bp,編碼前體氨基酸155和160個,信號肽由N端23和38個氨基酸殘基構(gòu)成;成熟蛋白均為酸性蛋白,等電點(diǎn)分別為5.10和4.75。同源性比對和進(jìn)化樹分析表明二者均有6個保守的半胱氨酸殘基,屬典型的氣味結(jié)合蛋白,GmolOBP1與AconOBP1相似性高達(dá)67%。組織表達(dá)表明二者均可在成蟲觸角中表達(dá),表達(dá)量豐富。IPTG濃度為0.2 mM時,兩個蛋白表達(dá)量較高,經(jīng)檢測濃度為1.53和1.40 mg/ml。熒光結(jié)合試驗中兩個重組蛋白對醛類氣味都表現(xiàn)出較好的結(jié)合能力,尤其是對癸醛和十二醛。GmolOBP1與十二醇的結(jié)合能力最強(qiáng),Ki值為5.46μM,寄主植物揮發(fā)物中與癸醛結(jié)合能力較強(qiáng),Ki值為13.14μM;GmolOBP6與順-8-十二碳烯乙酸酯的結(jié)合能力最強(qiáng),Ki值為6.93μM,與乙酸丁酯結(jié)合常數(shù)為11.89μM。順-8-十二碳烯乙酸酯引發(fā)雄蟲觸角電位反應(yīng)最強(qiáng),超過1。兩個蛋白對醛類物質(zhì)的特異性結(jié)合反應(yīng)有助于研究新型引誘劑,為梨小食心蟲的生物防治提供新的思路和方法。
【關(guān)鍵詞】：梨小食心蟲 氣味結(jié)合蛋白 組織表達(dá) 熒光結(jié)合試驗 觸角電位反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S433
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-18
• 1.1 昆蟲嗅覺感器10-11
• 1.2 昆蟲嗅覺感受機(jī)制11-12
• 1.3 昆蟲氣味結(jié)合蛋白12-16
• 1.3.1 種類與分布12
• 1.3.2 表達(dá)12-13
• 1.3.3 生理功能13
• 1.3.4 三維結(jié)構(gòu)13-14
• 1.3.5 與氣味分子的結(jié)合釋放機(jī)制14-15
• 1.3.6 配體結(jié)合試驗15-16
• 1.4 梨小食心蟲與氣味16
• 1.5 研究目的與意義16-17
• 1.6 研究內(nèi)容與技術(shù)路線17-18
• 1.6.1 研究內(nèi)容17
• 1.6.2 技術(shù)路線17-18
• 第二章 材料與方法18-25
• 2.1 材料18-20
• 2.1.1 供試蟲源18
• 2.1.2 主要藥劑18-20
• 2.2 方法20-25
• 2.2.1 基因擴(kuò)增20-21
• 2.2.2 構(gòu)建表達(dá)載體21-23
• 2.2.3 蛋白表達(dá)與純化23-24
• 2.2.4 熒光結(jié)合試驗24
• 2.2.5 觸角電位反應(yīng)（EAG）24-25
• 第三章 結(jié)果與分析25-37
• 3.1 基因分析25-30
• 3.2 蛋白表達(dá)30-32
• 3.3 組織表達(dá)32-33
• 3.4 熒光結(jié)合試驗33-36
• 3.4.1 Gmol OBP133
• 3.4.2 Gmol OBP633-36
• 3.5 EAG反應(yīng)36-37
• 第四章 結(jié)論與討論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 附錄45-47
• 致謝47-48
• 作者介紹48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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6 唐宇

本文編號：435347