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太白山典型植被土壤微生物多樣性及放線菌資源研究

發(fā)布時間:2017-05-28 03:01

  本文關(guān)鍵詞:太白山典型植被土壤微生物多樣性及放線菌資源研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:秦嶺是我國南北地理和氣候的分界線,巨大的高山落差形成其獨有的垂直氣候帶,植被帶及土壤類型亦相應(yīng)變化,蘊含著豐富的微生物資源。本文以秦嶺主峰太白山不同海拔典型純林植被土壤為研究材料,通過設(shè)計不同分離培養(yǎng)基,初步探究太白山不同植被土壤放線菌分離方法;并進一步以分離得到的放線菌為研究材料,通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,探討太白山地區(qū)放線菌資源的多樣性;同時利用高通量測序技術(shù)對太白山原核微生物多樣性進行研究。主要研究結(jié)果如下:1.南坡pH含量為5.68-6.41,北坡pH含量為5.07-6.58,北坡變幅比南坡大,北坡最低pH為5.07;有機質(zhì)含量極差較大,最大為77.8 g/kg,最小為11.7 g/kg;南坡供試土壤全氮含量最高為5.35 g/kg,北坡僅為2.81 g/kg,南坡土壤全氮含量高于北坡;硝銨態(tài)氮含量南北坡差異不大;速效磷含量南坡最高值為7.15 mg/kg,北坡最高值為4.05mg/kg,南坡土壤速效磷含量高于北坡;速效鉀含量南北坡基本持平。整體而言,太白山南北坡土壤養(yǎng)分大體呈現(xiàn)中海拔林地含量相對較高,如巴山冷杉,低海拔林地與高海拔林地含量相對較低,如銳齒櫟和高山草甸,即自低海拔至高海拔不同林地類型土壤養(yǎng)分整體呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。2.分離放線菌效果最好的是改良甘油-天門冬酰胺培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基在南北坡分離數(shù)量及種類上均占優(yōu),數(shù)量最高可達258×104 cfu/g土,種類最多為35種;改良高氏培養(yǎng)基在南坡的分離效果整體優(yōu)于北坡,更適用于分離南坡不同林地的土壤放線菌;R2A培養(yǎng)基在分離中海拔及高海拔林地的放線菌優(yōu)勢更明顯;海藻糖-脯氨酸培養(yǎng)基在分離放線菌數(shù)量及種類都最少,數(shù)量最高為7.0×104 cfu/g土,種類最多僅有4種。中海拔林地類型,如北坡的紅皮樺、牛皮樺,南坡的牛皮樺,分離的放線菌數(shù)量均顯著高于其它林地類型,最高海拔的高山草甸分離的放線菌數(shù)量最少。3.通過對太白山區(qū)土樣中分離的427株放線菌進行16S rDNA序列測定、結(jié)果比對去重和進一步分析,確定427株菌為89個種,分屬23個屬,顯示太白山土壤蘊含大量的放線菌資源。其中優(yōu)勢種群是鏈霉菌屬(Streptomyces),占供試菌株的88.06%,而在鏈霉菌屬(Streptomyces)中,S.enissocaesilis、S.cirratus和S.nojiriensis為優(yōu)勢種;除鏈霉菌屬(Streptomyces)外,余下的22個屬中,諾卡氏菌屬(Nocardia)為優(yōu)勢菌屬,分布較為廣泛,北里孢菌屬(Kitasatospora)、短桿菌屬(Renibacterium)和節(jié)桿菌屬(Arthorobacter)豐度相對較好。4.太白山南北坡土壤放線菌種屬差異較大。鑒定的23個屬中,南北坡共有的放線菌屬11個,北坡特有放線菌屬7個,分別是為厄氏菌屬(Overskovia)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、葡萄球菌(Staphylococcus)、短芽孢桿菌屬(Brevibacillus)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、韓國生工菌屬(Kribbella)和假單胞菌屬(Pseudomonas);南坡特有的放線菌屬5個,分別是放線菌共生放線桿菌(Aggregatibacter)、噬甲基菌屬(Methylophilus)、假黃色單胞菌屬(Micromonospora)、新鞘氨醇桿菌屬(Novosphingobium)和小單孢菌屬(Pseudoxanthomonas)。對不同植被多樣性進行分析發(fā)現(xiàn),每種植被土壤均存在其特有菌屬,可見不同植被土壤放線菌種類存在差異。5.高通量測序的覆蓋率指數(shù)(Good’s coverage)顯示相似度為0.97的條件下,土壤OTUs涵蓋了土壤中98.1-99.4%的細菌,覆蓋指數(shù)較高,說明本次測序結(jié)果可以準確地反映土壤中微生物多樣性的真實情況。群落結(jié)構(gòu)分析表明,在門水平,含量相對豐富的是變形菌門(Proteobacteria)、酸桿菌門(Acidobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、綠彎菌門(Chloroflexi)、硝化螺旋菌門(Nitrospirae)、擬桿菌(Bacteroidetes)、芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)、厚壁菌門(Firmicutes)、疣微菌門(Verrucomicrobia)、纖維桿菌門(Fibrobacteres)、Candidates-division-TM7、浮霉菌門(Planctomycetes)、Candidates-division-WS3。其中,Proteobacteria(變形菌門)在所有樣品中的豐度均最高。Actinobacteria(放線菌門)在不同土樣的豐度存在一定差異,北坡遼東櫟和南北坡太白紅杉相對豐度較高,均高于20%;最高海拔高山草甸的豐度一般。且放線菌門(Actinobacteria)的相對豐度呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢,這與分離得到可培養(yǎng)放線菌的分布規(guī)律一致。
【關(guān)鍵詞】:太白山 放線菌 16S rDNA 高通量測序 種群多樣性 生態(tài)分布
【學(xué)位授予單位】:西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:S154.3
【目錄】:
  • 摘要5-7
  • ABSTRACT7-11
  • 第一章 文獻綜述11-19
  • 1.1 放線菌資源研究的意義11
  • 1.2 秦嶺地區(qū)微生物資源研究11-12
  • 1.2.1 秦嶺地區(qū)概況11-12
  • 1.2.2 放線菌資源12
  • 1.3 放線菌的篩選12-14
  • 1.3.1 樣品的預(yù)處理13
  • 1.3.2 抑制劑13
  • 1.3.3 培養(yǎng)基13-14
  • 1.4 高通量測序技術(shù)14-17
  • 1.4.1 高通量測序技術(shù)簡介14-15
  • 1.4.2 高通量測序技術(shù)在細菌分類學(xué)的應(yīng)用15
  • 1.4.3 高通量測序技術(shù)在宏基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)的應(yīng)用15-16
  • 1.4.4 高通量測序技術(shù)在單細胞測序中的應(yīng)用16-17
  • 1.5 論文設(shè)計思路17-19
  • 1.5.1 研究目的及意義17
  • 1.5.2 研究內(nèi)容17-18
  • 1.5.3 技術(shù)路線18-19
  • 第二章 太白山典型植被土壤養(yǎng)分特征19-26
  • 2.1 材料與方法19-20
  • 2.1.1 材料19-20
  • 2.1.2 方法20
  • 2.2 結(jié)果與分析20-24
  • 2.2.1 pH21-22
  • 2.2.2 有機質(zhì)22
  • 2.2.3 氮素營養(yǎng)22-23
  • 2.2.4 磷素營養(yǎng)23-24
  • 2.2.5 鉀素營養(yǎng)24
  • 2.3 小結(jié)與討論24-26
  • 第三章 太白山典型植被土壤放線菌的分離及生態(tài)分布規(guī)律26-34
  • 3.1 材料與方法26-27
  • 3.1.1 材料26-27
  • 3.1.2 方法27
  • 3.2 結(jié)果與分析27-32
  • 3.2.1 不同培養(yǎng)基分離放線菌數(shù)量27-28
  • 3.2.2 不同培養(yǎng)基分離放線菌種類28-29
  • 3.2.3 不同林地類型分離放線菌的數(shù)量及分布規(guī)律29-30
  • 3.2.4 不同林地類型分離放線菌的種類及分布規(guī)律30-31
  • 3.2.5 放線菌數(shù)量與土壤養(yǎng)分的相關(guān)性31-32
  • 3.3 小結(jié)與討論32-34
  • 第四章 太白山典型植被土壤可培養(yǎng)放線菌種群多樣性及生態(tài)分布規(guī)律34-48
  • 4.1 材料與方法34-36
  • 4.1.1 材料34
  • 4.1.2 方法34-36
  • 4.2 結(jié)果與分析36-46
  • 4.2.1 16S rDNA序列分析36-42
  • 4.2.2 放線菌新物種資源分析42
  • 4.2.3 太白山放線菌種屬分布規(guī)律42-43
  • 4.2.4 不同坡向放線菌種屬分布規(guī)律43-44
  • 4.2.5 不同植被類型放線菌種屬分布規(guī)律44-46
  • 4.3 小結(jié)與討論46-48
  • 第五章 基于高通量測序技術(shù)的微生物多樣性及生態(tài)分布規(guī)律48-59
  • 5.1 材料與方法48-49
  • 5.1.1 材料48
  • 5.1.2 方法48-49
  • 5.2 結(jié)果與分析49-57
  • 5.2.1 樣本測序結(jié)果及取樣深度驗證49-51
  • 5.2.2 不同林地類型土壤細菌多樣性分析51-52
  • 5.2.3 不同林地土壤細菌群落結(jié)構(gòu)分析52-54
  • 5.2.4 聚類分析54-56
  • 5.2.5 主成分分析56-57
  • 5.3 小結(jié)與討論57-59
  • 第六章 總結(jié)59-62
  • 6.1 結(jié)論59-61
  • 6.2 本研究的創(chuàng)新點61
  • 6.3 展望61-62
  • 參考文獻62-69
  • 附錄69-71
  • 致謝71-72
  • 作者簡介72

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本文編號:401719

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