丁香假單胞菌是一種常見的植物病原菌,其擁有廣泛的宿主,能夠感染各種各樣的植物。能夠使植物葉片出現棕色斑點、芽變褐色、樹干和樹枝的腐爛、植株凍害以及果實的倒塌,其疫情爆發(fā)能夠造成嚴重的經濟損失。本研究的主要研究對象為本室自主分離的一株具有冰核活性的一株丁香假單胞菌MB03,探索該菌株中的一個GntR家族轉錄調控因子InpR對其體內基因的轉錄調控作用以及調控的分子機制。當中斷了 InpR基因后,與野生菌株相比,生長明顯變慢,表明InpR蛋白直接或間接調控MB03的生長代謝。從這一表型出發(fā),以轉錄組數據為依據,篩選其中發(fā)生明顯上下調的基因,設計相應的DNA探針進行體外EMSA實驗。通過EMSA等實驗驗證了 InpR對基因VT47₁440(氨基酸通透酶)、VT47₂4100(�；�-CoA脫氫酶)VT47₁7390(富馬酸水合酶)的直接調控作用。對上述三個基因進行RT-qPCR實驗,結果發(fā)現在突變株MB487中三個基因的表達量菌出現了明顯的下調作用,說明InpR正調控這些基因的表達。為了探究小分子物質對InpR調控的影響,從上述靶...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1.1InpR補償質粒構建流程

華中農業(yè)大學2019級碩士研究生學位（畢業(yè)）論文與分析除后影響丁香假單胞菌MB03生長因回補菌株的構建研究中，對InpR基因進行的敲除（張中娜2014），回補的時候并回補。因此利用實驗室改造的補償質粒pMB693進行InpR的回補經證明能夠在丁香假單胞菌中較好的....

圖3.1.2補償菌株構建

得到重組菌MB711，再進行PCR的驗證是否轉入的是所需的目標質粒，結果均符合預期（圖3.1.2.E）。ABCDE圖3.1.2補償菌株構建Fig3.1.2Constructionofcomlimentstrain圖A：M為5KDNAmaker，泳....

圖3.1.3野生菌MB03、InpR敲除菌與回補菌株生長曲線

華中農業(yè)大學2019級碩士研究生學位（畢業(yè)）論文MB03、InpR敲除菌與回補菌株生長曲線測定一樣，LB培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)條件下，同時測定野生曲線。在中斷InpR后，野生菌株的生長明顯變慢，，但是相對于突變株來說表型有了一定的恢復（圖B03的生長有關，可能調控生長....

圖3.3.13個片段結合序列的驗證

S3-4：……GGCGGCTGGCCTGGACCAGGCCCA……S1-1S1-2S1-3S1-4S2-1S2-2S2-3S2-4

本文編號：3937396