丁香假單胞菌是一種常見的植物病原菌,其擁有廣泛的宿主,能夠感染各種各樣的植物。能夠使植物葉片出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)、芽變褐色、樹干和樹枝的腐爛、植株凍害以及果實(shí)的倒塌,其疫情爆發(fā)能夠造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究的主要研究對(duì)象為本室自主分離的一株具有冰核活性的一株丁香假單胞菌MB03,探索該菌株中的一個(gè)GntR家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子InpR對(duì)其體內(nèi)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用以及調(diào)控的分子機(jī)制。當(dāng)中斷了 InpR基因后,與野生菌株相比,生長(zhǎng)明顯變慢,表明InpR蛋白直接或間接調(diào)控MB03的生長(zhǎng)代謝。從這一表型出發(fā),以轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為依據(jù),篩選其中發(fā)生明顯上下調(diào)的基因,設(shè)計(jì)相應(yīng)的DNA探針進(jìn)行體外EMSA實(shí)驗(yàn)。通過EMSA等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了 InpR對(duì)基因VT47₁440(氨基酸通透酶)、VT47₂4100(�；�-CoA脫氫酶)VT47₁7390(富馬酸水合酶)的直接調(diào)控作用。對(duì)上述三個(gè)基因進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在突變株MB487中三個(gè)基因的表達(dá)量菌出現(xiàn)了明顯的下調(diào)作用,說明InpR正調(diào)控這些基因的表達(dá)。為了探究小分子物質(zhì)對(duì)InpR調(diào)控的影響,從上述靶...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1.1InpR補(bǔ)償質(zhì)粒構(gòu)建流程

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2019級(jí)碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文與分析除后影響丁香假單胞菌MB03生長(zhǎng)因回補(bǔ)菌株的構(gòu)建研究中，對(duì)InpR基因進(jìn)行的敲除（張中娜2014），回補(bǔ)的時(shí)候并回補(bǔ)。因此利用實(shí)驗(yàn)室改造的補(bǔ)償質(zhì)粒pMB693進(jìn)行InpR的回補(bǔ)經(jīng)證明能夠在丁香假單胞菌中較好的....

圖3.1.2補(bǔ)償菌株構(gòu)建

得到重組菌MB711，再進(jìn)行PCR的驗(yàn)證是否轉(zhuǎn)入的是所需的目標(biāo)質(zhì)粒，結(jié)果均符合預(yù)期（圖3.1.2.E）。ABCDE圖3.1.2補(bǔ)償菌株構(gòu)建Fig3.1.2Constructionofcomlimentstrain圖A：M為5KDNAmaker，泳....

圖3.1.3野生菌MB03、InpR敲除菌與回補(bǔ)菌株生長(zhǎng)曲線

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2019級(jí)碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文MB03、InpR敲除菌與回補(bǔ)菌株生長(zhǎng)曲線測(cè)定一樣，LB培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)條件下，同時(shí)測(cè)定野生曲線。在中斷InpR后，野生菌株的生長(zhǎng)明顯變慢，，但是相對(duì)于突變株來說表型有了一定的恢復(fù)（圖B03的生長(zhǎng)有關(guān)，可能調(diào)控生長(zhǎng)....

圖3.3.13個(gè)片段結(jié)合序列的驗(yàn)證

S3-4：……GGCGGCTGGCCTGGACCAGGCCCA……S1-1S1-2S1-3S1-4S2-1S2-2S2-3S2-4

本文編號(hào)：3937396