西洋參根腐病作為土傳病害,給西洋參的種植造成了嚴(yán)重影響。而木霉作為一種重要的生防真菌,在生物防治領(lǐng)域有重要的貢獻(xiàn)。實(shí)驗(yàn)室前期研究中發(fā)現(xiàn),深綠木霉（Trichoderma atroviride）HB20111對(duì)該病具有較好的防治效果。因此,本論文以深綠木霉為研究對(duì)象,一方面利用分子標(biāo)簽技術(shù),改造深綠木霉菌株,使其成為我們“可視化”的工具。另一方面,通過高通量測(cè)序,從土壤微生物群落的角度,探究應(yīng)用深綠木霉后對(duì)西洋參根際土壤微生物群落的影響,從生態(tài)學(xué)角度探究深綠木霉HB20111防治根腐病的相關(guān)機(jī)制,以期為西洋參根腐病相關(guān)的生物防治提供一定的理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)取得的結(jié)果如下:（1）以植物與農(nóng)桿菌雙元表達(dá)質(zhì)粒（p CAMBIA1301）為母載體,在多克隆為點(diǎn)處引入來源于真菌RNAi基因沉默干擾質(zhì)粒（p Silent-1）的Hyg表達(dá)框、Trcp啟動(dòng)子和終止子序列。構(gòu)建了絲狀真菌表達(dá)載體P-Trcp-HYG-Ds Red-GPDA,然后以含紅色熒光蛋白基因的質(zhì)粒p CMV-C-Ds Red為模板,克隆獲得紅色熒光蛋白基因序列,插入載體多克隆位點(diǎn)作為報(bào)告基因;同時(shí)在紅色熒光蛋白N端引入真菌gpd A啟... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 木霉菌在生防方面的研究進(jìn)展
        1.1.1 木霉菌拮抗機(jī)制
        1.1.2 木霉菌促生作用
        1.1.3 木霉菌對(duì)作物的生防研究進(jìn)展
    1.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的絲狀真菌熒光蛋白遺傳轉(zhuǎn)化研究
        1.2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化
        1.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)(ATMT)的真菌轉(zhuǎn)化的特點(diǎn)
        1.2.3 熒光蛋白標(biāo)記在植物病理中的應(yīng)用
    1.3 西洋參根腐病相關(guān)研究進(jìn)展
        1.3.1 西洋參根腐病
        1.3.2 生物防治相關(guān)研究
    1.4 土壤微生物群落的研究進(jìn)展
        1.4.1 研究土壤微生物的重要性
        1.4.2 高通量測(cè)序技術(shù)探究土壤微生物
    1.5 本實(shí)驗(yàn)的研究意義和技術(shù)路線
        1.5.1 研究意義
        1.5.2 技術(shù)路線
第2章 真菌熒光蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 試劑
        2.1.3 所用引物及序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.2.2 質(zhì)粒的提取
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)操作
        2.2.4 載體構(gòu)建步驟
        2.2.5 構(gòu)建載體轉(zhuǎn)化與驗(yàn)證
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 重組質(zhì)粒圖譜
        2.3.2 PCR檢測(cè)電泳結(jié)果
        2.3.3 酶切檢測(cè)電泳結(jié)果
        2.3.4 測(cè)序結(jié)果
    2.4 本章小結(jié)
第3章 農(nóng)桿菌介導(dǎo)深綠木霉轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建與優(yōu)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株及質(zhì)粒
        3.1.2 培養(yǎng)基
        3.1.3 試劑及器材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
        3.2.2 確定抑制農(nóng)桿菌生長所需的頭孢霉素濃度
        3.2.3 確定篩選木霉轉(zhuǎn)化子所需的潮霉素B濃度
        3.2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化深綠木霉
        3.2.5 木霉基因組的提取與純化
        3.2.6 木霉轉(zhuǎn)化子的驗(yàn)證
        3.2.7 假定轉(zhuǎn)化子的遺傳穩(wěn)定性分析
        3.2.8 深綠木霉轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化PCR驗(yàn)證
        3.3.2 篩選轉(zhuǎn)化子所需潮霉素的B濃度
        3.3.3 抑制農(nóng)桿菌生長所需的頭孢霉素濃度
        3.3.4 假轉(zhuǎn)化子檢測(cè)
        3.3.5 轉(zhuǎn)化子的遺傳穩(wěn)定性分析
        3.3.6 轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化
        3.3.7 不同農(nóng)桿菌對(duì)ATMT介導(dǎo)轉(zhuǎn)化深綠木霉的轉(zhuǎn)化效率的影響
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 高通量測(cè)序分析深綠木霉對(duì)西洋參根腐病的生防作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 試劑與耗材
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        4.2.2 現(xiàn)場(chǎng)準(zhǔn)備
        4.2.3 樣品的收集
        4.2.4 樣品的處理與調(diào)查
        4.2.5 土壤樣品基因組的提取
        4.2.6 測(cè)序分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 接種深綠木霉對(duì)西洋參出苗率的影響
        4.3.2 接種深綠木霉對(duì)西洋參發(fā)病率的影響
        4.3.3 OUT聚類分析
        4.3.4 Alpha多樣性分析
        4.3.5 Bate多樣性分析
        4.3.6 菌群差異分析
        4.3.7 土壤微生物的功能預(yù)測(cè)與分析
        4.3.8 微生物之間的互作關(guān)系分析
    4.4 本章小結(jié)
第5章 全文總結(jié)
    5.1 總結(jié)
    5.2 有待進(jìn)一步研究的問題
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間主要科研成果
    一、發(fā)表學(xué)術(shù)論文
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]農(nóng)桿菌介導(dǎo)哈茨木霉轉(zhuǎn)化系統(tǒng)優(yōu)化及突變體分析[D]. 黃亞麗.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008
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碩士論文
[1]小麥根腐病菌的熒光標(biāo)記及其與小麥的互作研究[D]. 閆立敏.河北科技師范學(xué)院 2012
[2]綠色木霉代謝抗生物質(zhì)發(fā)酵條件優(yōu)化、特性及其對(duì)芒果炭疽菌抑制作用研究[D]. 蔣雨.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3679027