小麥全蝕病是由禾頂囊殼小麥變種（Gaeumannomyces graminis var.tritici,Ggt）引起的小麥重要根部病害之一,發(fā)病區(qū)的小麥產(chǎn)量會降低20%-50%。在目前尚無有效抗病品種、輪作措施難以落實以及化學農(nóng)藥使用存在安全性風險的現(xiàn)狀下,生防菌劑的研發(fā)和應(yīng)用被寄予厚望�，F(xiàn)已證明芽孢桿菌（Bacillus spp.）、熒光假單胞菌（Psdeuomnoda fluorescens）等生防菌對小麥全蝕病有較好的防治效果。然而,由于熒光假單胞菌的定殖能力受環(huán)境影響較大,且在土壤中難以維持較高的種群密度,嚴重影響了其防病效果的持續(xù)性。近年來,越來越多的研究證明,茅孢桿菌較熒光假單胞菌在防治小麥全蝕病方面具有更強的優(yōu)勢。特別是貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）,不僅可以產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì),而且還可以產(chǎn)生芽孢,具有抗逆性強的特點,是防治小麥全蝕病的理想生防菌。本論文擬以實驗室擁有的一株從樟樹葉片中分離獲得的內(nèi)生生防菌——貝萊斯茅孢桿菌CC09菌株（簡稱:Bv）為材料,采用DNA重組、組織學、轉(zhuǎn)錄組學、蛋白質(zhì)組學、生物化學等技術(shù),研究該菌在小麥植株中的定殖、傳導... 

【文章來源】：南京大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１．植物ＰＴ丨的信號傳導機制（Ｂｉｇｅａｒｄ?ｅｔａｌ．?２０１５）??為了獲取植物細胞內(nèi)的更多營養(yǎng)物質(zhì)，實現(xiàn)在宿主的侵染、擴展，勢必要??克服植物的ＰＴ丨防御統(tǒng)

南京大學博士學位論文??中起到枳極的作用（ＳｃｈｉｅｂｅｒａｎｄＣｈａｎｄｅ丨２０１４）。??證據(jù)證實：病原菌的侵染可以誘導破壞植物體內(nèi)ＲＯＳ的積累，產(chǎn)生氧化迸發(fā)的現(xiàn)象，進而抑制�。颍幔睿洌茫瑁幔睿洌澹欤玻埃保矗�。然而，有證據(jù)表明，病原制宿主的ＲＯＳ反應(yīng)。例如，Ｈｅｍｅｔｓｂｅｒｇｅｒ?ｅｔ?ａｌ．?（粉菌（ｗａｙｔｆｏ）的Ｐｅｐ丨缺失突變體雖然但該病原菌侵染入宿主表皮后，其菌絲會停止進對該現(xiàn)象作了深入研究，發(fā)現(xiàn)：玉米黑粉菌Ｐｅｐｌ量的過氧化氫積累，并且編碼過氧化物酶的基因Ｐｅｔｓｂｅｒｇｅｒ?ｅｔａｌ＿?２０丨２）。然而，Ｐｅｐｌ效應(yīng)因子可以而阻礙了植物ＲＯＳ的產(chǎn)生，進而抑制了植物防御進一步的實現(xiàn)侵染植物組織（Ｈｅｍｅｔｓｂｅｒｇｅｒ?ｅｔ?ａｌ．?２Ｏｘｉｄａｓｅｓ?Ｍｌｔｏｃｈｏｎｄｆｉａ??

（３）電擊完成后，立即向電轉(zhuǎn)杯中加入ｌｍＬ的ＲＭ液體培養(yǎng)基，并將移至無菌的１．５ｍＬ離心管中。３７°Ｃ、２５０ｒｐｍ搖床震蕩培養(yǎng)４ｈ。??２．２．３?ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ表達載體的構(gòu)建??（１）采用ＰＣＲ擴增方法，從質(zhì)粒ｐＧＦＰ４４１２中獲得ＧＦＰ編碼基因ＧＦＰｍｕｔ大�。罚保坟摆�。正向引物為：５’－八�。鞍耍岸“税税耍埃鞍耍鞍税耍鞍税耍ǎ憾。保Ф《。ǎ海场环次餅椋海怠裕粒粒裕裕裕牵裕粒裕粒牵裕裕茫粒裕茫茫粒裕牵茫茫场�。ＰＣＲ?的擴增條件參照?２ＸＭａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ產(chǎn)品說明書進行。??（２）利用Ｘｂａｌ和Ｈｉｎｄ?ＩＩＩ酶處理和電泳純化，使質(zhì)粒ｐＨＴ３１５線性化（６ｂｐ），獲得用于基因克隆的質(zhì)粒載體。質(zhì)粒雙酶切的體系為２０ｐＬ，包ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ?質(zhì)粒?１４?（ｉＬ，Ｘｂａｌ?酶?２?｜ｉＬ，?Ｈｉｎｄｌｌｌ?酶?２?ｊａＬ，Ｔｅｒｍ。ｌＯＸＴａＢｕｆｆｅｒ?２?｜ｊＬ，置于３７°Ｃ的恒溫培養(yǎng)箱中，酶切１６?ｈ。??（３）利用Ｔ４連接酶，將ＧＦＰｍｕｔ３ａ基因與線性化的ｐＨＴ３１５載體連接（７２ｂｐ），經(jīng)電泳純化，獲得含ＧＦＰｍｕｔ３ａ基因的表達質(zhì)粒ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ。??（４）將ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ轉(zhuǎn)化至ＴｒａｎｓｌＯ大腸桿菌感受態(tài)細胞中，獲化子，用于該質(zhì)粒的大量制備。??ｌ：ｃｏＲｌ?（５７？）??ＳｄＫｌ?（ＳＭ）??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3564801