丁香假單胞菌是一種常見的植物病原菌,分布廣泛且種類眾多,目前有四十多個致病變種,甚至在南極洲冰層下都有它的存活跡象,因此近年來引起科學(xué)家的高度重視。其中屬番茄致病亞種Pseudomonas syringae pv.tomato.DC3000的研究最為集中,DC3000成為研究細(xì)菌和植物互作的模式菌株。除此之外,部分含有冰核蛋白的丁香假單胞菌能在-5℃～-2℃情況下引發(fā)植物形成凍霜從而對植物造成損害,本研究采用了本實(shí)驗(yàn)室從植物凍傷組織中分離得到的一株具有高冰核活性的丁香假單胞菌MB03展開。細(xì)菌中的sRNA（small non-coding RNA）是一類不具有編碼功能的小型核糖核酸片段,長度介于40 nt-500 nt之間,它們絕大部分位于基因間,對細(xì)菌的各項(xiàng)生命活動起調(diào)控作用。Hfq是一種在細(xì)菌中普遍存在的調(diào)控蛋白,其主要作用是作為sRNA的分子伴侶,協(xié)助sRNA發(fā)揮其作用,使其作用效果更加穩(wěn)固有效。本課題主線為丁香假單胞菌中的部分sRNA對于調(diào)控相關(guān)表型（分別是:氧化應(yīng)激耐受性、線蟲取食偏好性、T6SS活性、生物膜、運(yùn)動性等）的作用,并對sRNA參與細(xì)菌氧化應(yīng)激耐受性的調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行...

【文章來源】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1丁香假單胞菌MB03
    1.2 sRNA(small non-coding RNA)
    1.3 sRNA的分子伴侶Hfq
    1.4 本研究涉及的相關(guān)表型
        1.4.1 生物膜
        1.4.2 線蟲簡介
        1.4.3 Ⅵ型分泌系統(tǒng)(T6SS)
        1.4.4 運(yùn)動性
        1.4.5 氧化應(yīng)激
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑及配制
            2.1.2.1 培養(yǎng)基
            2.1.2.2 實(shí)驗(yàn)器材
            2.1.2.3 質(zhì)粒抽提、感受態(tài)細(xì)胞制備與快檢
            2.1.2.4 PCR、重組質(zhì)粒構(gòu)建及瓊脂糖經(jīng)膠電泳
            2.1.2.5 以秀麗隱桿線蟲為實(shí)驗(yàn)對象的生物學(xué)測定所需試劑
            2.1.2.6 基因敲除試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
        2.2.2 分子實(shí)驗(yàn)
            2.2.2.1 PCR 擴(kuò)增
            2.2.2.2 基因敲除
            2.2.2.3 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化
            2.2.2.4 細(xì)菌總RNA的提取及去基因組
            2.2.2.5 反轉(zhuǎn)錄
            2.2.2.6 實(shí)時熒光定量PCR
        2.2.3 表型實(shí)驗(yàn)
            2.2.3.1 結(jié)晶紫法檢測細(xì)菌生物膜的形成
            2.2.3.2 啟動子活性檢測方法與步驟
            2.2.3.3 T6SS活性實(shí)驗(yàn)
            2.2.3.4 線蟲取食偏好性實(shí)驗(yàn)
            2.2.3.5 運(yùn)動性實(shí)驗(yàn)
            2.2.3.6 氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 MB03 中預(yù)測得到的sRNA及相關(guān)特性分析實(shí)驗(yàn)
        3.1.1 MB03 中部分sRNA的篩選
        3.1.2 關(guān)于sRNA相關(guān)靶基因的通路分析
        3.1.3 不同溫度下sRNA的表達(dá)豐度
    3.2 sRNA缺失菌株的構(gòu)建及不同菌株氧化應(yīng)激方面的探究
        3.2.1 sRNA及 hfq缺失菌株的構(gòu)建
        3.2.2 對缺失菌株氧化應(yīng)激能力的探究
    3.3 缺失菌株其他表型的變化情況
        3.3.1 sRNA缺失菌株T6SS活性比較
        3.3.2 sRNA基因缺失菌株線蟲取食偏好性比較
        3.3.3 缺失菌株生物膜形成能力比較
        3.3.4 sRNA基因缺失菌株運(yùn)動性比較
4 小結(jié)與討論
    4.1 小結(jié)
    4.2 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄 本文所用引物


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]土壤微生物生物地理學(xué)：國內(nèi)進(jìn)展與國際前沿 [J]. 褚海燕,馮毛毛,柳旭,時玉,楊騰,高貴鋒.  土壤學(xué)報. 2020(03)
[2]牛源大腸桿菌對秀麗隱桿線蟲的致病性研究 [J]. 白慧麗,彭昊,李軍,李常挺,陶立,陳忠偉,吳翠蘭,潘艷,曾蕓,龔俞.  中國畜牧獸醫(yī). 2020(03)
[3]易感線蟲番茄品種Rutgers遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立 [J]. 吳文濤,董瑩,鄧人可,薛美靜,張靖,王揚(yáng).  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2020(01)
[4]Effect of graphene oxide exposure on intestinal Wnt signaling in nematode Caenorhabditis elegans [J]. Peidang Liu,Huimin Shao,Yan Kong,Dayong Wang.  Journal of Environmental Sciences. 2020(02)
[5]Loss of miR-83 extends lifespan and affects target gene expression in an age-dependent manner in Caenorhabditis elegans [J]. Emmanuel Enoch Dzakah,Ahmed Waqas,Shuai Wei,Bin Yu,Xiaolin Wang,Tao Fu,Lei Liu,Ge Shan.  Journal of Genetics and Genomics. 2018(12)
[6]氧化應(yīng)激誘導(dǎo)劑甲萘醌對脫氮假單胞桿菌代謝過程的影響 [J]. 楊勇,劉群,章帥文,李昆太.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(05)
[7]丁香假單胞菌番茄致病變種DC3000甘油激酶基因的克隆與功能研究 [J]. 劉曉柱,李銀鳳,于志海,劉曉輝.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(06)
[8]sRNA phrs調(diào)控銅綠假單胞菌生物膜形成的功能研究 [J]. 徐鳳琴,黃松音,莫紅平,曾俏君,孫婧,周春霞,李紅玉.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2017(10)
[9]環(huán)丙沙星聯(lián)合乳鐵蛋白多肽嵌合體對銅綠假單胞菌PAO1生物被膜和QS系統(tǒng)信號分子表達(dá)的影響 [J]. 章曉燕.  中外醫(yī)學(xué)研究. 2016(05)
[10]下呼吸道感染銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素及生物膜形成能力與耐碳青霉烯類抗菌藥物相關(guān)性分析 [J]. 孟小斌,古漢福,雷南鳳,張國雄,范曉怡.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2015(19)

碩士論文
[1]丁香假單胞菌殺線蟲毒性因子PtxA的殺蟲活性與作用機(jī)制[D]. 田甜.華中農(nóng)業(yè)大學(xué). 2018
[2]固氮施氏假單胞菌非編碼RNA NfiS轉(zhuǎn)錄后調(diào)控氧化脅迫反應(yīng)[D]. 張宏揚(yáng).中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院. 2018
[3]丁香假單胞菌MB03冰核蛋白基因低溫依賴型啟動子轉(zhuǎn)錄活性的研究[D]. 孟姍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué). 2011



本文編號：3536782