核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）是一種世界性的植物病原真菌,其寄主范圍十分廣泛,每年都造成巨大的經(jīng)濟損失。在致病過程中,核盤菌能夠形成侵染結(jié)構(gòu)——侵染墊,以利于其附著并刺穿寄主植物表面。此外,核盤菌能夠合成并分泌草酸與細(xì)胞壁降解酶類等致病相關(guān)因子,以利于其抵御寄主防衛(wèi)反應(yīng)并侵染寄主植物。C2H2型鋅指蛋白是真核生物中最大的轉(zhuǎn)錄因子超家族,但真菌中的相關(guān)研究較少。C2H2型鋅指蛋白的功能主要集中于生長發(fā)育、分生孢子形成、有性生殖、致病性、耐藥性以及脅迫應(yīng)答等方面。核盤菌SsZFH1蛋白在氨基酸序列的C端含有1個C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)域,故屬于C2H2型鋅指蛋白家族。本研究克隆得到Sszfh1基因上游944 bp序列（L）與下游929 bp序列（R）,將上下游序列連接至敲除載體pXEH上以得到pXEH-L-R重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入野生型核盤菌原生質(zhì)體內(nèi)對Sszfh1基因進行敲除,經(jīng)過抗性篩選與PCR檢測后得到兩株Sszfh1基因敲除突變體菌株。本研究構(gòu)建了Sszfh1基因回補載體pNDH-OGG-Sszfh1,將該載體轉(zhuǎn)入Sszfh1基因敲... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

核盤菌生活史示意圖

2.1 Sszfh1 基因的獲取與生物信息學(xué)分析通過 FungiDB 數(shù)據(jù)庫，可獲取 Sszfh1 基因的序列信息；通過 NCBI Protein數(shù)據(jù)庫可獲得 Sszfh1 基因的結(jié)構(gòu)域信息；通過 BLASTP 程序與 Smart BLAST 程序可對 Sszfh1 基因進行序列比對分析。2.2 重組載體的構(gòu)建本實驗室存有基因敲除載體 pXEH，該載體帶有絲狀真菌啟動子 PtrpC，并帶有潮霉素抗性標(biāo)記基因。潮霉素抗性標(biāo)記基因的上游和下游分別有兩個多克隆位點，將 Sszfh1 基因上游（L）及下游（R）片段分別酶切并連接至潮霉素抗性標(biāo)記基因的上游和下游的兩個多克隆位點可得到重組的敲除載體 pXEH-L-R，基于同源重組的 Sszfh1 基因敲除策略如圖 2.1 所示。

圖 3.1.2 SmartBLAST 程序比對結(jié)果g 3.1.2 Analysis of SmartBLAST prog驗證H-L-R 的酶切驗證內(nèi)切酶（Bgl Ⅱ/EcoR I 與 Sal I/Hind ，以未酶切的 pXEH-L-R 質(zhì)粒作為陰中進行電泳實驗，實驗結(jié)果如圖 3.2.Sclerotinia sclerotiorumDrosophila melanogaster(2)Drosophila melanogasterDanio rerioHomo sapiensMus musculus

【參考文獻】：
期刊論文
[1]核盤菌轉(zhuǎn)錄因子SsMCM1原核表達與亞細(xì)胞定位[J]. 王雪亮,劉言志,呂興明,張艷華,張祥輝,劉金亮,潘洪玉,張鑫生.  植物病理學(xué)報. 2019(01)



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