核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）是一種世界性的植物病原真菌,其寄主范圍十分廣泛,每年都造成巨大的經(jīng)濟損失。在致病過程中,核盤菌能夠形成侵染結(jié)構(gòu)——侵染墊,以利于其附著并刺穿寄主植物表面。此外,核盤菌能夠合成并分泌草酸與細胞壁降解酶類等致病相關(guān)因子,以利于其抵御寄主防衛(wèi)反應(yīng)并侵染寄主植物。C2H2型鋅指蛋白是真核生物中最大的轉(zhuǎn)錄因子超家族,但真菌中的相關(guān)研究較少。C2H2型鋅指蛋白的功能主要集中于生長發(fā)育、分生孢子形成、有性生殖、致病性、耐藥性以及脅迫應(yīng)答等方面。核盤菌SsZFH1蛋白在氨基酸序列的C端含有1個C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)域,故屬于C2H2型鋅指蛋白家族。本研究克隆得到Sszfh1基因上游944 bp序列（L）與下游929 bp序列（R）,將上下游序列連接至敲除載體pXEH上以得到pXEH-L-R重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入野生型核盤菌原生質(zhì)體內(nèi)對Sszfh1基因進行敲除,經(jīng)過抗性篩選與PCR檢測后得到兩株Sszfh1基因敲除突變體菌株。本研究構(gòu)建了Sszfh1基因回補載體pNDH-OGG-Sszfh1,將該載體轉(zhuǎn)入Sszfh1基因敲... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

核盤菌生活史示意圖

2.1 Sszfh1 基因的獲取與生物信息學分析通過 FungiDB 數(shù)據(jù)庫，可獲取 Sszfh1 基因的序列信息；通過 NCBI Protein數(shù)據(jù)庫可獲得 Sszfh1 基因的結(jié)構(gòu)域信息；通過 BLASTP 程序與 Smart BLAST 程序可對 Sszfh1 基因進行序列比對分析。2.2 重組載體的構(gòu)建本實驗室存有基因敲除載體 pXEH，該載體帶有絲狀真菌啟動子 PtrpC，并帶有潮霉素抗性標記基因。潮霉素抗性標記基因的上游和下游分別有兩個多克隆位點，將 Sszfh1 基因上游（L）及下游（R）片段分別酶切并連接至潮霉素抗性標記基因的上游和下游的兩個多克隆位點可得到重組的敲除載體 pXEH-L-R，基于同源重組的 Sszfh1 基因敲除策略如圖 2.1 所示。

圖 3.1.2 SmartBLAST 程序比對結(jié)果g 3.1.2 Analysis of SmartBLAST prog驗證H-L-R 的酶切驗證內(nèi)切酶（Bgl Ⅱ/EcoR I 與 Sal I/Hind ，以未酶切的 pXEH-L-R 質(zhì)粒作為陰中進行電泳實驗，實驗結(jié)果如圖 3.2.Sclerotinia sclerotiorumDrosophila melanogaster(2)Drosophila melanogasterDanio rerioHomo sapiensMus musculus

【參考文獻】：
期刊論文
[1]核盤菌轉(zhuǎn)錄因子SsMCM1原核表達與亞細胞定位[J]. 王雪亮,劉言志,呂興明,張艷華,張祥輝,劉金亮,潘洪玉,張鑫生.  植物病理學報. 2019(01)



本文編號：3346394