小菜蛾（Plutella xylostella L.）是鱗翅目世界性害蟲,主要危害十字花科蔬菜,每年都會造成巨大的經(jīng)濟損失。目前小菜蛾幾乎對所有化學殺蟲劑都產(chǎn)生了抗藥性。自氟苯蟲酰胺問世以來,由于不合理的用藥使得小菜蛾對該藥劑抗藥性發(fā)展迅速。為探討小菜蛾對氟苯蟲酰胺的抗性機制,本項目以敏感品系S、室內篩選的氟苯蟲酰胺抗性品系R_h、田間抗性種群R_b和槲皮素處理的氟苯蟲酰胺抗性品系Q_Rh四個品系/種群為研究對象,分別利用RNA-seq和iTRAQ進行組學測序,對獲得的數(shù)據(jù)進行比較分析,為揭示抗性小菜蛾的生物學特征,小菜蛾抗性和敏感品系在轉錄和蛋白水平上的差異,和小菜蛾對氟苯蟲酰胺抗性機理研究提供有力的支持。研究結果如下:1.在前期研究的基礎上,以實驗室篩選的氟苯蟲酰胺抗性品系,反向汰選獲得4946位點為GAG純合基因型的抗性品系,再進一步進行氟苯蟲酰胺選擇壓抗性汰選,獲得抗性倍數(shù)為1889.82倍的基因型為GAG的小菜蛾抗氟苯蟲酰胺品系（R_h）。測得小菜蛾田間抗性種群（R_b）對氟苯... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

信息分析流程圖

圖 2 信息分析流程Fig2. Bioinformatics Analysis Pipeline譜數(shù)據(jù)經(jīng)過相應工具轉換成 mgf 格式文件后，用蛋白質鑒定軟件庫搜索鑒定。質控分析同時進行以判斷本次數(shù)據(jù)是否合格。數(shù)據(jù)合閾值，得到最終可信的蛋白質鑒定結果。隨后進行 iTRAQ 定量分選出我們更為關心的顯著差異蛋白。在有重復實驗的情況下，定量次定量數(shù)據(jù)質量是否達到標準。最后會進行 GO、Pathway、COG白的 GO、Pathway 富集分析。 iTRAQ 定量 數(shù)據(jù)的定量我們采用華大自主研發(fā)的 IQuant（Wen et al., 2014）軟ascot Percolator（Brosch et al., 2014）算法，該算法采用機器學習算結果進行重新打分，從而提高結果的鑒定率。首先在譜圖/肽段水（PSM-level FDR<=0.01），從而獲得顯著性鑒定的譜圖和肽段列表

圖 3 氟苯蟲酰胺抗性品系總 RNA 檢測Fig.3 Detection of flubendiamide-resistance strain total RNA：1～12 敏感品系 4 齡小菜蛾單頭蟲體總 RNA 提取結果（重復 12 次 The results of total RNA isolation from single-headed larvae of the fourth-xylostella in susceptible strains, 12 replicates增片段的檢測%瓊脂糖凝膠電泳檢測目的片段 PCR 擴增結果（圖 4），目的條增條帶，無引物二聚體，目的條帶大小約為 110bp，表明本次，可用于后續(xù)測序實驗。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]氯蟲苯甲酰胺對小菜蛾魚尼丁受體基因mRNA表達量的影響[J]. 孫麗娜,楊代斌,芮昌輝,崔麗,袁會珠.  農藥學學報. 2012(02)
[2]轉錄組研究新技術:RNA-Seq及其應用[J]. 祁云霞,劉永斌,榮威恒.  遺傳. 2011(11)
[3]蛋白質組技術在昆蟲抗藥性機理研究中的應用[J]. 程濱,程羅根,羅勛.  安徽農業(yè)科學. 2008(21)
[4]甜菜夜蛾對氯氟氰菊酯抗性的表皮穿透機理[J]. 劉永杰,沈晉良.  昆蟲學報. 2003(03)
[5]昆蟲解毒酶解毒機理及其在農藥污染治理中的應用[J]. 黃菁,喬傳令.  農業(yè)環(huán)境保護. 2002(03)
[6]表皮穿透和GABAA受體不敏感性在小菜蛾對阿維菌素抗性中的作用[J]. 吳青君,張文吉,張友軍,徐寶云,朱國仁.  昆蟲學報. 2002(03)
[7]棉鈴蟲對氰戊菊酯抗性機理研究[J]. 吳益東,沈晉良,譚福杰,尤子平.  南京農業(yè)大學學報. 1995(02)

博士論文
[1]貴州白背飛虱抗藥性動態(tài)監(jiān)測及其抗性相關基因的轉錄組學分析[D]. 金劍雪.貴州大學 2017
[2]小菜蛾對Bt Cry1Ac毒素抗性的分子機制研究[D]. 郭兆將.中國農業(yè)科學院 2016
[3]抗Cry1Ac殺蟲晶體蛋白近等基因系小菜蛾中腸蛋白質基因組學研究[D]. 朱勛.華中農業(yè)大學 2014
[4]淡色庫蚊抗藥性比較蛋白質組學研究[D]. 王衛(wèi)杰.南京醫(yī)科大學 2014



本文編號：3212277