轉基因成分的檢測是轉基因生物監(jiān)管的首要環(huán)節(jié)。隨著基因工程技術的快速發(fā)展，越來越多的商業(yè)化轉基因生物進入市場，同時轉基因生物中基因修飾愈加復雜化和多樣化，可以對多靶標序列同時進行檢測分析的快速、準確、高通量的核酸檢測技術成為現(xiàn)階段轉基因成分檢測技術發(fā)展的主要方向。本研究基于目前轉基因成分高通量核酸檢測技術發(fā)展中面臨的眾多靶標序列難以有效平行擴增的困境，致力研發(fā)了兩種高通量的核酸檢測技術系統(tǒng)：基于親疏水微孔芯片技術的高通量檢測（MACRO）和基于微流控技術平臺的高通量檢測。MACRO系統(tǒng)利用親疏水微孔芯片技術將眾多的轉基因靶標進行類似于多重PCR方法的核酸富集，然后結合DNA芯片技術將富集好的眾多核酸序列產(chǎn)物進行一次性的批量檢測，并再通過軟件快速讀取檢測結果來實現(xiàn)高通量檢測的。它和傳統(tǒng)多重復合PCR的不同之處在于各個靶標并不存在于同一液相體系中，而是在一個個微孔中進行著各自的擴增，進而有效避免了傳統(tǒng)多重PCR方法的局限。利用該系統(tǒng)可以同時檢測出91個轉基因靶標（包含18個通用元件，20個外源插入基因，45個事件和8種內源基因），覆蓋了截止到2012年底已經(jīng)廣泛商業(yè)化的97%的轉基因事件。該... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

996-2012年全球轉基因作物的種植面積情況[2]

上海交通大學碩士學位論文植轉基因農(nóng)作物：蘇丹首次種植轉基因Bt棉花，古巴首次種植轉基因前仍是轉基因作物種植的領先生產(chǎn)者；加拿大轉基因油菜的種植面積最頃；巴西則連續(xù)四年推動全球范圍內的轉基因作物增長，其種植面積%，逐漸縮小與美國的差距；亞洲的中國和印度繼續(xù)擴大Bt棉花的種植盟成員國（葡萄牙、西班牙、捷克、羅馬尼亞和斯洛伐克）種植的總面，均為Bt玉米，其中數(shù)西班牙種植的面積最大；2012年，南非的轉基因繼續(xù)擴大，達到了290萬公頃；而隨著蘇丹國批準種植轉基因作物，目個國家種植轉基因作物種植，分別為南非、蘇丹、埃及和布基納法索[

上海交通大學碩士學位論文4圖1-3 轉基因作物及產(chǎn)品的檢測流程圖Figure 1-3 The procedure of GMO detection1.3.1 基于目的蛋白的檢測方法基于目的蛋白的檢測方法，主要指針對轉入的外源基因表達的蛋白為檢測目標的方法，即應用免疫和物理化學的方法，通過檢測外源基因在轉入的作物中所表達的蛋白來檢測其中的轉基因成分[10,14-15]。免疫的方法，主要是指特異性的抗體結合顯色反應對待檢的目的蛋白（即抗原）進行檢測的方法，其中的酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）和側向流動免疫測定（LFD）是廣泛應用的方法。近年來，一些基于目的蛋白的新方法也被陸續(xù)報道，如 Fantozzi 等[16]報道了一種可與特異抗體熒光小球偶聯(lián)的共價微球體進行免疫檢測的方法來檢測 BT11 和MON810 中的 Cry1Ab 目的蛋白；而 Shim 等人[17]則研發(fā)出一種三明治式的 ELISA 方法用于檢測轉基因甜椒里，基因 Bar 編碼的草丁膦乙酰轉移酶目的蛋白的表達。其他一些依據(jù)蛋白檢測的方法有：免疫磁電化學傳感器法[18]，二維電泳法[19]和質譜法[20]等。然而基于蛋白檢測的方法有其局限性

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3045200