花生（Arachis hypogaea L.）是世界上重要的油料和經濟作物。在我國南方產區(qū),大部分花生種植地土壤為酸性。酸性土壤不僅pH值低、瘦瘠,而且還有低磷、鋁毒等諸多障礙因素,嚴重限制了花生的生物固氮及產量。因此,分離及應用適應酸性土壤的高效固氮根瘤菌,對提高花生固氮效率及產量,改良酸性土壤具有重要意義。本研究從福建省三個典型的酸性土壤地點:安溪、福安、尤溪,采集了17個花生品種的根瘤。利用平板劃線結合鏡檢的方法,從田間采集的新鮮花生根瘤中分離、純化根瘤內生菌。主要研究結果如下:（1）分離到可培養(yǎng)的花生根瘤內生菌189株,進行分子鑒定,結果顯示,分離到的菌主要包含根瘤菌屬,慢生型根瘤菌屬,芽孢桿菌屬,雷夫松氏菌屬,微桿菌屬,類芽孢桿菌屬,葡萄球菌屬,單胞菌屬等32個細菌屬。通過16S V4-V5區(qū)段的測序分析發(fā)現(xiàn),其中32株根瘤內生菌屬于花生根瘤菌,經過系統(tǒng)發(fā)育樹分析,27株根瘤菌與Bradyrhizobium SEMIA6396、Bradyrhizobium japonicun MN-139聚在一起,5株根瘤菌與Rhizobium G2312和Rhizobium 5502G聚在... 

【文章來源】：福建農林大學福建省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

根瘤菌樣品采集Fig.2-1SampleCollectionofRhizobium

與根瘤菌同源性較高的根瘤內生菌保留；最后利用 16S rDNA 全段基因測序果對篩選到的具有結瘤固氮效果較好的根瘤內生菌進行較為準確系統(tǒng)發(fā)育分析。2.2.3.2 水培高效固氮根瘤菌回接驗證利用低氮花生營養(yǎng)液（見 2.1.2.3）進行水培試驗，檢驗獲得的根瘤菌是否具有花生結瘤、固氮的能力。根瘤菌培養(yǎng)：將-80℃保存的供試菌株轉接于 YT 液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌OD600=1.2。消毒后的花生種子催芽 7 天，胚根長為 3-5 cm 時接種根瘤菌。接種后的花生幼苗在低氮營養(yǎng)液中生長 30 天。生長室光周期：日/夜=16 h/8 h，溫度：日/夜=26 ℃/24 ℃本試驗包括接種不同根瘤菌與不接種根瘤菌處理，供試根瘤菌菌株 10 株，4 個生物重復，共計 44 盆。收獲后，分別測定植株生物量、結瘤數(shù)、植株含氮量和固氮酶性等。(A)(B) (C) (D)

圖 2-3 田間種植圖Fig. 2-3 Schematic diagram of field trials注：P1、P2、P3分別代表花生品種閩花 8 號、冀花 26 號、泉花 3 號，CK、R1、R2、R3、R4、RM分別代表對照、根瘤菌 AXLQ1-6、FAMB12-6、YZMB13-3、YZMO14-4、混合根瘤菌。Note: P1, P2and P3represent peanut varieties Minhua 8, Jihua 26 and Quanhua 3 respectively, CK, R1,R2, R3, R4and RMrepresent control, Rhizobium AXLQ1-6, FAMB12-6, YZMB13-3, YZMO14-4 andmixed Rhizobium, respectively.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析系統(tǒng)發(fā)育樹構建：選取具有較高同源性的、已發(fā)表的根瘤菌序列作為參比菌株序列，利用 BioEdit 軟件對供試菌株和參比菌株序列進行多序列自動比對，再利用 Mega7.0 軟件，采用 Kimura-2 參數(shù)，進行鄰接法（Neighbor-Joining）分析，生成系統(tǒng)發(fā)育40 個重復

【參考文獻】：
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本文編號：2999759