球孢白僵菌是白僵菌屬真菌,能產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物。隨著人們的深入研究發(fā)現(xiàn),球孢白僵菌次生代謝產(chǎn)物具有多種生物學活性,如抗菌、體外抑制艾滋病毒HIV-1、抗肝癌、肺癌、白血病等。其中具有生理活性的代謝產(chǎn)物多為非核糖體多肽,為挖掘球孢白僵菌的非核糖體多肽,該實驗用不同碳源和不同氮源培養(yǎng)基培養(yǎng)球孢白僵菌,探究不同碳氮源對其代謝產(chǎn)物抗菌活性以及18個非核糖體多肽合成酶基因表達量的影響,并對其非核糖體多肽合成酶基因進行了克隆鑒定。實驗結(jié)果如下:不同碳源對球孢白僵菌提取物抗菌活性的影響不及氮源顯著。在不同氮源抗菌活性實驗中,3種耐藥性人體致病菌(金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和糞腸球菌)僅對胰蛋白胨培養(yǎng)所得提取物敏感。耐藥性綠膿桿菌對除酪蛋白胨以外的氮源均不敏感。以普通人體致病菌作為供試細菌時,胰蛋白胨提取物抗菌效果顯著高于其余氮源。不同碳氮源對球孢白僵菌非核糖體多肽合成酶基因的表達量有顯著影響。以18個NRPS基因中總體表達量較高的NRPS6、NRPS7、NRPS17基因為例,NRPS6基因在乳糖為碳源時,表達量高于其余碳源,麥芽糖顯著抑制該基因的表達。胰蛋白胨為氮源時,NRPS6基因表達量顯著高于其余氮源。NRPS7基因在乳糖下表達量極高,在甘露糖和麥芽糖下幾乎不表達,在牛肉粉下表達量較高,在胰蛋白胨和酪蛋白胨下幾乎不表達。NRPS17基因在肌糖下表達量最高,麥芽糖下最低,不同氮源對NRPS17基因表達的影響差異較小,其中胰蛋白胨誘導表達能力略強于其他三種氮源。對NRPS17基因全長cDNA克隆后,生物信息學分析結(jié)果顯示,NRPS17基因cDNA開放閱讀框總長4 194 bp,編碼1 397個氨基酸殘基,其蛋白序列分子相對分子質(zhì)量為153 566.27,結(jié)構(gòu)式為C6865H10797N1813O2073S52。等電點和脂肪系數(shù)分別為5.10和90.77。此外,該蛋白為不穩(wěn)定蛋白,其不穩(wěn)定系數(shù)為42.78,半衰期為30 h。BLAST比對發(fā)現(xiàn)其包含A-T-C結(jié)構(gòu)域;SignalP顯示其為分泌蛋白,位于細胞質(zhì)基質(zhì)。系統(tǒng)發(fā)育顯示NRPS17蛋白序列與其他合成鐵載體SidC的NRPS聚為一支,推測其合成鐵載體。本研究為球孢白僵菌NRPS基因功能的挖掘和活性新化合物的尋找提供參考。
【學位單位】：云南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S476.12
【部分圖文】：

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【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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相關碩士學位論文 前1條

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本文編號：2865830