【摘要】：放線菌不僅是土壤生態(tài)系統(tǒng)中主要的組成部分,也是各種藥用價(jià)值天然產(chǎn)物的重要來源。受植物生長(zhǎng)和根部微生物的影響,植物根內(nèi)、根際放線菌的種類比較多樣、功能比較復(fù)雜。植物根內(nèi)和根際放線菌不僅能在植物受到病原菌侵襲時(shí)協(xié)助植物免受病原體的侵染,也能通過產(chǎn)生生物活性物質(zhì)來幫助植物抵抗病害。從放線菌中獲得新型活性化合物或者尋找合適的微生物菌劑,來幫助植物抵抗病蟲害,從而提高農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量,是新世紀(jì)人們所關(guān)注的一個(gè)熱點(diǎn)問題�；谥参锔鶅�(nèi)和根際放線菌的特殊性,許多研究人員開始將其作為活性放線菌的分離源。本研究首次選用傳統(tǒng)藥用植物半夏和感條銹小麥品種taichun29為實(shí)驗(yàn)材料,探索了這兩種植物根內(nèi)和根際放線菌的資源,旨在發(fā)現(xiàn)新型生物活性物質(zhì)和新種放線菌。本實(shí)驗(yàn)選用5種分離培養(yǎng)基,分離純化出了168株放線菌。在藥用植物半夏的根內(nèi)和根際分別分離出33株和64株放線菌;在感條銹小麥品種taichun29的根內(nèi)和根際分別分離出17株和54株放線菌。利用1種病原細(xì)菌和13種病原真菌作為靶標(biāo)菌來研究這些放線菌的活性,結(jié)果表明有23株放線菌具有生物活性的。其中17株至少能抑制3種病原菌的生長(zhǎng),10株至少能抑制5種病原菌的生長(zhǎng),6株至少能抑制10種以上病原菌的生長(zhǎng),發(fā)現(xiàn)有4株菌分別對(duì)蘋果輪斑菌、柑橘痂圓孢菌、核盤菌和尖孢鐮刀菌黃瓜專化型抑菌直徑達(dá)18mm以上,有1株菌不僅對(duì)12種病原菌都有抑制作用外對(duì)其中的六種病原菌產(chǎn)生的抑菌直徑超過20mm。此外,還有1株放線菌BXT54均能抑制這14種病原菌的生長(zhǎng),通過篩選確定了兩種適合BXT54發(fā)酵的液體培養(yǎng)基(Medium 2和PTM),并探究了其發(fā)酵產(chǎn)生活性化合物的穩(wěn)定性,結(jié)果表明此活性物質(zhì)具有一定的耐高溫和耐酸堿的能力。這為接下來代謝產(chǎn)物分離純化及化合物結(jié)構(gòu)鑒定提供了理論依據(jù)。通過觀察分離得到的菌株在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的形態(tài)特征,并結(jié)合菌株16S rRNA在EzBioCloud網(wǎng)站上序列比對(duì)分析的結(jié)果,確定對(duì)菌株SJ 21進(jìn)行多相分類學(xué)鑒定�；�16S rRNA基因的系統(tǒng)發(fā)育分析和形態(tài)學(xué)特征比較,推斷菌株SJ 21屬于螺孢菌屬(Spirillospora)。與SJ 21相似度最高的菌株是Spirillospora albida IFO 12248~T(98.75%,16S rRNA序列的相似度),其次是Actinomadura montaniterrae JCM 16995~T(98.68%)、Actinomadura fibrosa ATCC 49459~T(98.53%)和Actinomadura nitritigenes DSM 44137~T(98.38%)。通過在表型特征、生理生化特征、化學(xué)分類特征和分子生物學(xué)特征四方面對(duì)菌株SJ 21和與其相似性較高的四個(gè)菌株進(jìn)行綜合分析,得出菌株SJ21是螺孢菌屬的新種。將其命名為Spirillospora tritici。對(duì)Spirillospora tritici基因組框架圖的測(cè)定及次級(jí)代謝產(chǎn)物基因簇的預(yù)測(cè),為Spirillospora tritici在螺孢菌屬中分類學(xué)地位的研究和次級(jí)代謝產(chǎn)物的預(yù)測(cè)提供了重要的信息基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S154.3
【圖文】：

注：大于 50%的靴值在進(jìn)化樹分支上顯示。0.005 為兩個(gè)核苷遺傳距離。圖 3-2a 基于 BXG23 的 16S rDNA 基因序列，使用 Neighbour-joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3-2a Neighbour-joining tree based on 16S rRNA gene sequences showing relationship between strain BXGand its closest relatives

注：大于 50%的靴值在進(jìn)化樹分支上顯示。0.005 為兩個(gè)核苷遺傳距離。圖 3-2b 基于 BXG23 的 16S rDNA 基因序列，使用 Maximum-likelihood 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3-2b Maximum-likelihood tree based on 16S rRNA gene sequences showing relationship between strainBXG23 and its closest relatives注：大于 50%的靴值在進(jìn)化樹分支上顯示。0.002 為兩個(gè)核苷遺傳距離。圖 3-3a 基于 BXT25 的 16S rDNA 基因序列，使用 Neighbour-joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3-3a Neighbour-joining tree based on 16S rRNA gene sequences showing relationship between strain BXT25and its closest relatives

注：大于 50%的靴值在進(jìn)化樹分支上顯示。0.005 為兩個(gè)核苷遺傳距離。圖 3-2b 基于 BXG23 的 16S rDNA 基因序列，使用 Maximum-likelihood 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 3-2b Maximum-likelihood tree based on 16S rRNA gene sequences showing relationship between strainBXG23 and its closest relatives

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2805289