【摘要】：紅樹林是一種介于海洋與陸地之間的過渡型的生態(tài)系統(tǒng),為微生物提供了十分多樣的棲息環(huán)境,有著豐富的生物多樣性資源,包括微生物新物種的發(fā)現(xiàn),生物活性代謝產(chǎn)物的提取等等。香港米鋪紅樹林自然保護(hù)區(qū)(E114.05°,N22.49°)是國際重要濕地之一,其中蘊(yùn)藏著大量寶貴的生物資源。本實(shí)驗(yàn)對米埔紅樹林自然保護(hù)區(qū)土壤進(jìn)行采樣,利用稀釋平板法對其中的微生物分離純化,再通過16S rRNA對純化菌種進(jìn)行測序鑒定,得到共36個(gè)屬117株菌,包括3株新種細(xì)菌和1株有明顯抑菌圈的菌株,并在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中對其中一株新菌XY-L28~T進(jìn)行了新菌鑒定的研究工作和對抑菌菌株XY-K2做了植物促生潛力的研究。以四種植物致病真菌HLJ(Alternaria sp.),C-30(Rhizoctonia solani),玉米小斑(Ustilaginoidea oryzae)和玉米大斑(Exserohilumturcicum LeonardetSuggs)作為活性篩選模型,對117株菌的次級代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離和活性研究,共篩到4株次級代謝產(chǎn)物具有較強(qiáng)抗真菌生物活性的活性菌株。以上證明了紅樹林土壤中可培養(yǎng)微生物的多樣性、新穎性和化學(xué)多樣性。對Bacillus屬的菌株XY-L28~T進(jìn)行了菌落表型,生理生化特征和系統(tǒng)發(fā)育的菌種鑒定有關(guān)研究。XY-L28~T為一株革蘭氏陽性、桿狀、輕微嗜熱的細(xì)菌。從香港米埔內(nèi)后海灣拉姆薩爾國際重要濕地分離得到。16S rRNA序列發(fā)育分析結(jié)果表明與其最相似的標(biāo)準(zhǔn)菌為Bacillus asahii MA001~T,相似度為96.73%。適合的生長條件為NaCl含量0 5%(w/v)(最適0.5%),pH值6.5 9.0(最適為pH7.5)和溫度20 45°C(最適37°C)。主要脂肪酸為iso-C_(15:0),anteiso-C_(15:0)和C_(16:1)ω7c alcohol。主要呼吸醌為甲基萘醌-7(MK-7)。主要極性脂為磷脂,磷脂酰甘油,磷脂酰乙醇胺,雙磷脂酰甘油和一種無法鑒定的脂類。DNA中G+C的含量為37.4 mol%。根據(jù)其表型,生理生化特征和系統(tǒng)發(fā)育鑒定結(jié)果,可以確定該菌為Bacillus屬的一個(gè)新種細(xì)菌,命名為Bacillus acanthi sp.nov.。其標(biāo)準(zhǔn)菌的實(shí)驗(yàn)室編號為XY-L28~T,在德國菌種保藏中心和中國海洋微生物菌種保藏管理中心的保藏編號分別為DSM 104296~T和MCCC 1K03287~T。從樣品中分離得到一株有明顯抑菌圈的菌株,16S rRNA鑒定為bacillus屬,命名為XY-K2 bacillus sp.。發(fā)現(xiàn)XY-K2菌體對HLJ(Alternaria solani)有較強(qiáng)活性,故對其抗真菌活性進(jìn)行進(jìn)一步研究,通過生物活性追蹤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其活性物質(zhì)為水溶性非蛋白大極性物質(zhì)。對其進(jìn)行廣譜抑菌研究,XY-K2對稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)亦有較強(qiáng)活性,繼續(xù)用XY-K2對稻瘟菌進(jìn)行離體實(shí)驗(yàn),揭示該菌通過促使稻瘟菌孢子提前產(chǎn)生附著胞的抗菌抑制機(jī)理,同時(shí)對XY-K2進(jìn)行了植物促生菌相關(guān)特性的實(shí)驗(yàn),證明了菌XY-K2可以作為一種水稻植物促生菌并且可能作為新型天然農(nóng)藥的原料。
【學(xué)位授予單位】：深圳大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S714.3
【圖文】：

圖 1.1 番茄早疫�。ˋlternaria solani）部分癥狀（拍攝于本實(shí)驗(yàn)室，2017至 2017 年年底，防治番茄早疫病主要有三種方式：增進(jìn)栽培方式，種和使用真菌殺菌劑。單單增進(jìn)栽培技術(shù)并不能完全控制早疫病害種往往有效周期不長，真菌殺菌劑通常又會(huì)造成環(huán)境污染并且附帶著成本。所以，新興的生物防治技術(shù)是如今生態(tài)農(nóng)業(yè)所積極倡導(dǎo)與努力友好型防治方式，也是目前在番茄早疫病這一塊研究的熱門方向[48水稻古往今來一直是我國的主要農(nóng)作物，歷朝歷代水稻都提供了大部所需的糧食�？伤镜纳a(chǎn)也一直受到各種病害威脅，尤其是稻瘟導(dǎo)，因稻瘟病而減產(chǎn)的水稻，每年可以達(dá)到 10%，這些減產(chǎn)的水稻足 萬人[49]。稻瘟病的病原菌為 Magnaportheoryzae，也是通過分生孢子孢子先粘附在寄主的表面，然后孢子萌發(fā)，形成萌芽管，萌芽管伸長

圖 2.1 紅樹林土壤可培養(yǎng)細(xì)菌抗真菌活性（48h）. XY-J102（Streptomyces albolongus）脂溶性次級代謝產(chǎn)物對玉米小斑菌活性，1mL PDB + 1102 粗浸膏溶液；b. XY-J102 對 C-30 菌活性，1mL PDB + 1μL XY-J102 粗浸膏溶液；c. C-30組，1mL PDB + 1μL DMSO 溶液；d. C-30 菌無活性菌株（XY-J72 Streptomyces hydrogenans）1mL PDB + 1μL XY-J72 粗浸膏溶液結(jié)論1）從紅樹林土壤樣品中分離得到屬于 75 個(gè)種 36 個(gè)屬的 117 株菌，且 株新種細(xì)菌，揭示了其豐富的可培養(yǎng)微生物的多樣性、新穎性和潛在的價(jià)值。

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本文編號：2727854