【摘要】："魯保一號"菌劑對雜草菟絲子生防效果良好,但是受制于菌種退化問題其進一步應用受到限制。本研究通過對"魯保一號"菌的生物學性狀進行分析,明確其菌種培養(yǎng)特性:最佳培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基,最佳培養(yǎng)溫度為25~28℃,最佳培養(yǎng)pH值為5~8。同時,利用農桿菌介導的遺傳轉化方法進行"魯保一號"菌株轉化,并初步構建了約含2300個陽性轉化子的T-DNA插入突變體庫。轉化子經(jīng)連續(xù)繼代6次培養(yǎng)后潮霉素B抗性穩(wěn)定,隨機挑取的20個轉化子均能PCR克隆出潮霉素基因,轉化子是由T-DNA插入引起的,且篩選抗性能夠穩(wěn)定遺傳。以上研究為后期篩選獲得致病力穩(wěn)定的遺傳改良菌株,并進一步應用奠定了基礎。
【圖文】：

直徑不存在顯著差異。但是，綜上分析菌絲重量和分圖１“魯保一號”菌株菌落與分生孢子Ｆｉｇ．１ＣｏｌｏｎｙａｎｄｃｏｎｉｄｉａｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎＡ：“魯保一號”菌落ＣｏｌｏｎｙｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ；Ｂ：分生孢子ＣｏｎｉｄｉａｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ．生孢子產量等因素，ＰＤＡ培養(yǎng)基為最適合“魯保一號”菌株生長和產孢的培養(yǎng)基，培養(yǎng)１０ｄ后其產孢量達到２８５．４×１０９個孢子／皿左右，遠遠大于其他真菌培養(yǎng)基。２．２．２溫度對“魯保一號”菌生長的影響以ＰＤＡ為基礎培養(yǎng)基，研究７個溫度梯度下“魯保一號”菌株生長狀況。由表２可以看出，綜合分析菌落直徑和分生孢子產量，菌株在２５和２８℃培養(yǎng)條件下生長最好，而當溫度低于２５℃時或高于２８℃時菌落直徑和產孢量均顯著下降，而相對高溫（大于２８℃）對于菌株生長的影響更大。圖２“魯保一號”菌系統(tǒng)發(fā)育樹分析Ｆｉｇ．２ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ２．２．３ｐＨ值對“魯保一號”菌生長的影響由表３圖３“魯保一號”菌株在潮霉素Ｂ濃度梯度培養(yǎng)基上的耐受實驗Ｆｉｇ．３ＴｏｌｅｒａｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｔｈｅＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎｏｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｏｆｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ可以看出，“魯保一號”菌其適應范圍較廣，在ｐＨ值３～１０上均能生長，其中在ｐＨ４～９下菌落直徑不存在顯著差異。結合產孢量分析，“魯保一號”菌最適ｐＨ值為５～８，在該范圍內其菌落直徑和產孢量均相近

培養(yǎng)基為最適合“魯保一號”菌株生長和產孢的培養(yǎng)基，培養(yǎng)１０ｄ后其產孢量達到２８５．４×１０９個孢子／皿左右，遠遠大于其他真菌培養(yǎng)基。２．２．２溫度對“魯保一號”菌生長的影響以ＰＤＡ為基礎培養(yǎng)基，研究７個溫度梯度下“魯保一號”菌株生長狀況。由表２可以看出，綜合分析菌落直徑和分生孢子產量，菌株在２５和２８℃培養(yǎng)條件下生長最好，而當溫度低于２５℃時或高于２８℃時菌落直徑和產孢量均顯著下降，而相對高溫（大于２８℃）對于菌株生長的影響更大。圖２“魯保一號”菌系統(tǒng)發(fā)育樹分析Ｆｉｇ．２ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ２．２．３ｐＨ值對“魯保一號”菌生長的影響由表３圖３“魯保一號”菌株在潮霉素Ｂ濃度梯度培養(yǎng)基上的耐受實驗Ｆｉｇ．３ＴｏｌｅｒａｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｔｈｅＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎｏｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｏｆｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ可以看出，“魯保一號”菌其適應范圍較廣，，在ｐＨ值３～１０上均能生長，其中在ｐＨ４～９下菌落直徑不存在顯著差異。結合產孢量分析，“魯保一號”菌最適ｐＨ值為５～８，在該范圍內其菌落直徑和產孢量均相近。而當培養(yǎng)基ｐＨ＜５和ｐＨ＞８時其分生孢子產量顯著降低。２．３Ｔ－ＤＮＡ插入突變體庫的構建２．３．１“魯保一號”菌株對潮霉素Ｂ的耐受性選勸魯保一號”菌株為材料，在含不同潮霉素Ｂ濃度的ＰＤＡ培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，結果表明（圖３），在潮霉素Ｂ濃度為２５０μｇ／ｍＬ的培養(yǎng)基上，接種的分生孢子不

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