【摘要】：根結(jié)線蟲具有寄主廣泛,難防治等特點(diǎn),在世界范圍內(nèi)給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來巨大損失。其中南方根結(jié)線蟲嚴(yán)重?fù)p害了農(nóng)作物的產(chǎn)量和農(nóng)民的收益。但是由于南方根結(jié)線蟲獨(dú)特的寄生性,對(duì)科研工作者研究其相關(guān)基因功能帶來不少困難,隨著RNA干擾技術(shù)的逐步成熟,為研究南方根結(jié)線蟲基因功能提供了技術(shù)支持,加速了南方根結(jié)線蟲基因功能的研究進(jìn)程。本研究以南方根結(jié)線蟲與秀麗隱桿線蟲具有高同源性的MAPK基因?yàn)槟康幕?利用RNAi技術(shù)初步鑒定了MAPK基因在南方根結(jié)線蟲化感趨化行為中的調(diào)節(jié)功能,為南方根結(jié)線蟲病的防治方面提供了思路。本研究基于秀麗隱桿線蟲突變株的篩選,發(fā)現(xiàn)MAPK家族基因與線蟲的趨化行為具有相關(guān)性。在南方根結(jié)線蟲基因組中與秀麗隱桿線蟲MAPK家族基因同源的基因有Mi-mpkk-1、Mi-mekk-2、Mi-lin-45、Mi-let-60�；衔顰-1在0.1M濃度下能夠有效吸引南方根結(jié)線蟲,吸引率達(dá)到29%。為保障南方根結(jié)線蟲具有更好的活力,本研究采用低濃度(0.1%)的間苯二酚刺激線蟲取食,將分別經(jīng)過含有Mi-mpk-1-dsRNA、Mi-mekk-2-dsRNA、Mi-lin-45-dsRNA、Mi-let-60-dsRNA的浸泡液處理過的J2幼蟲進(jìn)行RNAi。其中,RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照相比,Mi-mpk-1基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量下降53.56%,Mi-mek-2基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量下降44.47%,Mi-lin-45基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量下降17.26%,Mi-let-6 基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量下降46.88%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明相應(yīng)靶基因得到成功抑制。在驗(yàn)證這四個(gè)基因在線蟲化感趨化方面的功能的實(shí)驗(yàn)中,干擾成功的根結(jié)線蟲對(duì)化合物A-1的趨化性明顯下降,其中經(jīng)Mi-mpk-l-dsRNA、Mi-let-60-dsRNA處理的線蟲對(duì)化合物A-1的吸引率下降了27-42.76%,表明這四個(gè)基因?qū)�蟲化感趨化行為有調(diào)控作用。干擾成功的根結(jié)線蟲對(duì)番茄的侵染率顯示,與Buffer緩沖液和 NC-dsRNA 相比,實(shí)驗(yàn)處理組Mi-mpk-1-dsRNA、Mi-mek 2-dsRNA、Mi-let-60-dsRA線蟲接種的番茄植株根結(jié)減少了 70.01%-87.67%,卵塊減少了31.60%-71.86%,其中實(shí)驗(yàn)處理番茄根部的根系比較發(fā)達(dá)健壯,植株長勢(shì)良好,而Mi-lin-45-dsRNA處理的線蟲對(duì)番茄的侵染產(chǎn)生的卵塊和根結(jié)的數(shù)量有所減少,無顯著差異。本論文研究結(jié)果表明在南方根結(jié)線蟲中MAPK家族四個(gè)相關(guān)基因在根結(jié)線蟲對(duì)宿主的識(shí)別和侵染過程中有調(diào)控作用。
【圖文】：

１．２侵染過程逡逑南方根結(jié)線蟲是植物內(nèi)寄生線蟲，生活史為卵、幼蟲、成蟲三個(gè)階段，，（如逡逑圖１－１），邋一般營孤雌生殖，具有侵染能力的是自由活動(dòng)的二齡幼蟲（Ｊ２），侵染部逡逑位主要為植物的須根和側(cè)根，Ｊ２階段的根結(jié)線蟲建立取食位點(diǎn)后，便繼續(xù)發(fā)育形逡逑成三齡幼蟲（Ｊ３）、四齡幼蟲（Ｊ４）以至雌成蟲（ａｄｕｌｔ邋ｆｅｍａｌ）［７］。在建立取食位點(diǎn)逡逑前，根結(jié)線蟲頭部的頭感器（ａｍｐｈｉｄ）能夠幫，助線蟲感受土壤中的各種化學(xué)信逡逑號(hào)，進(jìn)而尋找寄主和定位侵染［８］，線蟲通常先由植株根尖伸長區(qū)入侵，用口針刺穿逡逑原生木質(zhì)部的原形成層細(xì)胞，將分泌物注入到形成層細(xì)胞內(nèi)，刺激植物根部形成逡逑根結(jié)作為自己的取食位點(diǎn)［９］。根結(jié)線蟲尾部的尾感器（ｐｈａｓｍｉｃｌ）也具有化學(xué)信號(hào)感逡逑知力和分泌特殊分泌物的能力［１（）］。另外根結(jié)線蟲的體壁（ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｓ／ｃｕｔｉｄｅ）產(chǎn)生逡逑１逡逑

達(dá)［１７］。逡逑１．３．邋２邋ＭＡＰＫ途徑在６／呀＾５中的相關(guān)研究逡逑目前報(bào)道Ｃ．邋ｅ／ｅｇａｒａ中有三條ＭＡＰＫ通路（如圖１－２）。第一條是ＳＡＰＫ／ＪＮＫｓ逡逑（應(yīng)激活化蛋白激酶／ｃ－ＪｕｎＮ端激酶）。該通路由基因組成，在線蟲逡逑中被確認(rèn)是神經(jīng)通路的一部分，參與協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)。第二條是ｐ３８信號(hào)通路，由核心逡逑元件ｍｙ－ｉ、組成，參與線蟲免疫反應(yīng)。第三條是ＥＲＫｓ邋（細(xì)胞外信號(hào)逡逑調(diào)節(jié)激酶）通路，由核心基因／〖ｎ－４５、ｍｅＡ：－２、ｍｐｋ－ｉ組成，該通路是Ｃ．ｅ〖ｅｇ＜ｍｓ存逡逑活和生長發(fā)育所必需的［１８，１９］。ＪＮＫ通路通過正調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子在Ｃ．ｅ／ｅｇａｗ逡逑的壽命和抗應(yīng)激反應(yīng)起作用。Ｓｅｕｎｇ邋Ｗｏｏｋ扣ａ／．的研究表明ＪＮＫ通路與胰島素信逡逑號(hào)途徑平行，最后共同作用于對(duì)線蟲的壽命起調(diào)節(jié)作用。盧卜／可以直接逡逑與也／－Ｍ相互作用并使其磷酸化從而促進(jìn)進(jìn)入細(xì)胞核［２（）］。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)扣灸－ｉ逡逑對(duì)入核和ｄａ／Ｍ靶基因（超氧化物歧化酶３，Ｓ０Ｄ－３）在周圍非神經(jīng)元組織逡逑中的表達(dá)有促進(jìn)作用
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S432.45

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 徐國凱;南方根結(jié)線蟲MiMEK2、MiLIN45基因的分離及其表達(dá)分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

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本文編號(hào)：2624520