【摘要】：扁桃擬莖點(diǎn)霉(Phomopsis amygdali)引起的桃縊縮潰瘍病是桃生產(chǎn)上重要的病害之一。帶菌苗木及接穗是病害向無病區(qū)傳播的主要途徑。嚴(yán)格的檢疫措施是保證無病區(qū)健康生產(chǎn)的關(guān)鍵。準(zhǔn)確、靈敏、快速的檢測方法是嚴(yán)格執(zhí)行檢疫措施及研究病害發(fā)生規(guī)律的有力工具。將扁桃擬莖點(diǎn)霉組蛋白H3(histone H3)基因與其近緣種比對發(fā)現(xiàn),該基因特異性強(qiáng),適合作為分子檢測的靶標(biāo)。針對histone H3基因?yàn)榘袠?biāo),設(shè)計(jì)了特異性引物和Taq Man探針,建立了扁桃擬莖點(diǎn)霉的熒光定量PCR檢測方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn),該方法只能特異識別扁桃擬莖點(diǎn)霉。檢測靈敏度可達(dá)4×10~1copies·uL~(-1),比常規(guī)PCR檢測方法高1 000倍;孢子檢測最低限達(dá)2個(gè)孢子,比常規(guī)PCR檢測方法高10倍,且僅需1 h即可完成檢測。該方法用于田間樣品檢測,扁桃擬莖點(diǎn)霉的陽性檢出率達(dá)86%,高于分離培養(yǎng)法和常規(guī)PCR檢出結(jié)果。本研究建立的基于Taq Man探針的熒光定量PCR檢測體系可用于田間對扁桃擬莖點(diǎn)霉的快速檢測。
[Abstract]:Constriction canker caused by (Phomopsis amygdali) is one of the most important diseases in peach production. Bacterial seedlings and scions are the main ways to spread the disease to the disease-free areas. Strict quarantine measures are the key to ensuring healthy production in disease-free areas. Accurate, sensitive and rapid detection method is a powerful tool to strictly carry out quarantine measures and study the regularity of disease occurrence. By comparing the histone H3 (histone H3) gene with its relative species, it was found that the H3 gene was highly specific and suitable for molecular detection. Specific primers and Taq Man probes were designed for the detection of histone H _ 3 as a target, and a fluorescence quantitative PCR method was established for the detection of Pterylocus mandshurica. The results showed that this method could only specifically identify Pteromyces almond. The detection sensitivity is 4 脳 10~1copies uL~ (-1), which is 1 000 times higher than that of the conventional PCR method, and the lowest detection limit of spores is 2 spores, which is 10 times higher than that of the conventional PCR detection method, and the detection can be completed in only 1 hour. The method was applied to the field sample detection. The positive rate of Pteromyces almond was 86%, which was higher than that of culture method and routine PCR. The fluorescent quantitative PCR system based on Taq Man probe can be used for rapid detection of Verticillium almond in the field.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院;農(nóng)作物生物災(zāi)害綜合治理教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;無錫出入境檢驗(yàn)檢疫局;上海農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心;江蘇省植物保護(hù)站;江蘇省出入境檢驗(yàn)檢疫局;
【基金】：無錫市科技發(fā)展基金(CSE11N1307)
【分類號】：S432.4

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本文編號：2355087