【摘要】：【目的】在大腸桿菌中表達(dá)純化蘇云金芽胞桿菌HD73的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sigma K(σK)�！痉椒ā縋CR擴(kuò)增出蘇云金芽胞桿菌HD73中sig K基因的ORF(Open reading frame)裝載到帶有His標(biāo)簽的表達(dá)載體p ET21b上,轉(zhuǎn)入到表達(dá)菌株BL21(DE3)中獲得重組菌株BL21(p ETsig K),通過SDS-PAGE、鎳柱親和純化、陰離子交換純化和凝膠遷移實(shí)驗(EMSA)等方法對Sigma K蛋白進(jìn)行提取、純化和生物活性分析�！窘Y(jié)果】正確表達(dá)出大小約為27 k D的His-Sigma K蛋白,并獲得了純化的蛋白。EMSA結(jié)果表明純化的His-Sigma K蛋白可以與受其控制的cry1Ac基因啟動子結(jié)合�！窘Y(jié)論】表達(dá)和純化了His-Sigma K蛋白,His-Sigma K具有與受其控制的啟動子結(jié)合的功能。
[Abstract]:[objective] to express and purify Sigma K (蟽 K)., a transcriptional regulator of Bacillus thuringiensis HD73 in Escherichia coli. [methods] the ORF (Open reading frame) of sig K gene of Bacillus thuringiensis HD73 was amplified by PCR and loaded into the expression vector pET21b with His tag. The recombinant strain BL21 (p ETsig K), was transformed into the expression strain BL21 (DE3) to extract Sigma K protein by SDS-PAGE, nickel column affinity purification, anion exchange purification and gel migration test (EMSA). Purification and bioactivity analysis. [results] His-Sigma K protein of about 27 KD was correctly expressed. The purified protein. EMSA showed that the purified His-Sigma K protein could bind to the cry1Ac gene promoter under its control. [conclusion] the expression and purification of His-Sigma K protein His-Sigma K have the function of binding to the promoter controlled by it.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所植物病蟲害生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗室;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.31270111,31300085)~~
【分類號】：S476.1;Q78

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本文編號：2167603