【摘要】：土傳病害是指生活在土壤中的病原微生物,在條件適宜時,從作物根部或莖部侵害作物而引起的病害。由于連茬耕作、長期施用化肥等問題,導(dǎo)致土壤中有害微生物的種類和數(shù)量增加,有益微生物的種類和數(shù)量急劇減少,微生物區(qū)系嚴重失調(diào),土傳病害進一步加重。枯萎病是一種真菌性土傳病害,尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)是引起該病害的主要病原菌,該菌株從根部侵染植物,破壞植物維管束,導(dǎo)致植物枯死,對棉花、番茄、黃瓜、冬瓜、甜瓜、絲瓜等經(jīng)濟作物危害嚴重。本研究以枯萎病為研究對象,利用對峙實驗、發(fā)酵實驗、盆栽實驗、田間試驗、生物統(tǒng)計相結(jié)合的方法,系統(tǒng)研究黑根霉(Rhizopus nigricans)和擬康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)對植物枯萎病的協(xié)同防治作用。本研究主要取得以下研究結(jié)果及結(jié)論：1.生防菌的篩選：利用對峙實驗測定5種絲狀真菌包括黑根霉(R.nigricans)、擬康氏木霉(T. pseudokoningii)、擬康氏木霉I(T.pseudokoningii I)、對植物枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌的4種�；�(黃瓜�；汀⑸剿帉；�、茄科專化型、禾谷�；�)和植物灰霉病病原菌灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的抑制效果,結(jié)果表明,5種生防菌對5種病原菌均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。其中,黑根霉和擬康氏木霉對5種病原菌都有較為明顯的抑制作用,抑制率均高于55.0%。所以,以下實驗選擇黑根霉和擬康氏木霉為研究對象,進一步分析其對枯萎病防治效果。2.混合發(fā)酵：以擬康氏木霉作為目標(biāo)菌,黑根霉作為挑戰(zhàn)菌,將黑根霉和擬康氏木霉按照不同比例接種量(1：1、1：2、1：3、1：4、1：5)接入到PDB培養(yǎng)基,進行混合發(fā)酵10天。利用菌絲生長速率實驗測定生防菌發(fā)酵液對尖孢鐮刀菌黃瓜轉(zhuǎn)化型和灰葡萄孢的抑制作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn),黑根霉發(fā)酵液和擬康氏木霉發(fā)酵液對兩種病原菌的抑制率分別為17.6%和47.1%、77.2%%和55.9%；1：1和1：2接種量的混合發(fā)酵,提高了發(fā)酵液對病原菌的抑制率,分別達到85.3%、67.6%、85.3%、70.6%；1：3、1：4、1：5反而降低了發(fā)酵液的抑菌效果。以下所用擬康氏木霉和黑根霉混合發(fā)酵液均為按照1：1接種量發(fā)酵。3.生防菌發(fā)酵液對黃瓜枯萎病的防治效果：溫室條件下,通過傷根處理的方法,在黃瓜根部接種107 cfu/ml的尖孢鐮刀菌孢子懸浮液,黃瓜發(fā)病率達100%。與只接種病原菌的對照組相比,擬康氏木霉發(fā)酵液處理組、黑根霉發(fā)酵液處理組的黃瓜發(fā)病率分別為68.7%、75.0%,相對防效分別為31.2%、25.0%。黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組的黃瓜發(fā)病率為56.3%,相對防效為43.7%,表明黑根霉和擬康氏木霉的混合發(fā)酵液對黃瓜枯萎病的防治效果比單一生防菌的防治效果強。4.病原菌的定量追蹤：利用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白標(biāo)記的病原菌在黃瓜植株各組織內(nèi)的含量,結(jié)果表明,在黃瓜植株根莖部出現(xiàn)褐變現(xiàn)象時,與病原菌處理的對照組相比,黃瓜根部、莖部及根際土壤中的病原菌含量最高,黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組的黃瓜根部、莖部及根際土壤中的病原菌含量最低。5.實時定量PCR實驗檢測黃瓜各組織及土壤中尖孢鐮刀菌的含量：尖孢鐮刀菌通過在根際土壤中定殖,侵染植物根系,進而侵染到植物根莖部的維管束組織,此時,植物的根莖部會出現(xiàn)褐變現(xiàn)象,植株開始萎焉。對黃瓜莖稈中的病原菌進行定量,結(jié)果表明,黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組、擬康氏木霉發(fā)酵液處理組、黑根霉發(fā)酵液處理組的抑制率分別為22.7%、18.5%、11.9%；對黃瓜根系中的病原菌進行定量,三種處理組的抑制率分別為24.3%、17.1%、7.2%；對黃瓜根際土壤中的病原菌進行定量,三種處理組的抑制率分別為20.5%、10.6%、6.9%。該結(jié)果進一步表明,黑根霉和擬康氏木霉協(xié)同作用抑制了病原菌的侵染。6.植物酶活實驗測定黃瓜防御酶的變化趨勢：通過對五種處理的不同時間段進行取樣,檢測過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶活變化趨勢,結(jié)果表明,與單一生防菌發(fā)酵液相比,混合生防菌發(fā)酵液處理組的黃瓜防御酶反應(yīng)速率最快,維持時間最長。7.田間實驗：通過對試驗田進行兩年的處理,從第一次用黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理對棉花枯萎病的沒有防治效果,到經(jīng)過五次處理之后,對棉花枯萎病的相對防效達到76.5%,并且棉花的株高,葉片濃綠程度及棉花花鈴數(shù)都有顯著的提高。綜上所述,本文通過尖孢鐮刀菌篩選出具有生防作用的黑根霉和擬康氏木霉,用這兩種真菌菌株制成的生物菌劑,具有防治枯萎病、改良土壤及促進棉花品質(zhì)的作用,今后應(yīng)進一步研究該生防菌在有機肥上的應(yīng)用。
[Abstract]:Soil - borne disease is a kind of pathogenic microorganism living in soil . In the condition of proper condition , the disease caused by crop root or stem is harmful to crops . The research mainly includes the following research results and conclusions : 1 . The research of Fusarium wilt is a fungal soil - borne disease . Fusarium wilt is a fungal soil - borne disease . The results showed that the inhibition rates of five kinds of pathogenic bacteria were 17.6% and 47.1 % , 77.2 % and 55.9 % , respectively .
1 : 1 and 1 : 2 mixed fermentation , the inhibition rate of fermentation broth against pathogenic bacteria was improved , respectively 85.3 % , 67.6 % , 85.3 % and 70.6 % , respectively .
1 : 3 , 1 : 4 , 1 : 5 , the bacteriostatic effect of the fermentation broth was reduced .
The inhibition rates of three treatment groups were 24 . 3 % , 17 . 1 % and 7 . 2 % , respectively .
The results showed that the response rate of cucumber defense enzymes was 76.5 % and 10.6 % and 6.9 % respectively .
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S432.4;S476.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 劉欣紅;;設(shè)施蔬菜土傳病害的成因及防治技術(shù)[J];河北農(nóng)業(yè)科技;2008年10期

2 董雅茹 ,王法政 ,王月珍;大豆根腐病感病程度與同工酶關(guān)系比較研究[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報;1987年02期

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本文編號：2119042