本文選題：甘藍(lán)夜蛾 + 細(xì)胞色素P450��； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：近年來(lái)甘藍(lán)夜蛾幼蟲(chóng)為害十分嚴(yán)重,對(duì)甘藍(lán)夜蛾的防治主要是以化學(xué)防治為主,其中擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑最為廣泛,這類(lèi)殺蟲(chóng)劑的廣泛使用已使昆蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性,細(xì)胞色素P450為昆蟲(chóng)蟲(chóng)體內(nèi)三個(gè)參與解毒作用的酶系之一,目前研究主要在與昆蟲(chóng)抗藥性相關(guān)的的CYP4、CYP6和CYP9家族中。本文通過(guò)克隆得到一個(gè)新的甘藍(lán)夜蛾細(xì)胞色素P450基因,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室得到的兩條甘藍(lán)夜蛾細(xì)胞色素P450基因,研究三個(gè)細(xì)胞色素P450基因序列特征,同時(shí)研究其對(duì)溴氰菊酯的代謝抗性。主要結(jié)果如下:1、CYP9A90基因c DNA序列全長(zhǎng)1828bp,Gen Bank登錄號(hào)為KR676343,編碼區(qū)長(zhǎng)731bp,5′端非編碼序列長(zhǎng)度586bp,3′端非編碼序列長(zhǎng)度653bp,532個(gè)氨基酸被編碼,預(yù)測(cè)得到蛋白的分子量和等電點(diǎn)分別為61.1k Da和8.84。2、分析在甘藍(lán)夜蛾6個(gè)不同組織器官中三個(gè)細(xì)胞色素P450基因的表達(dá)狀況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在5齡甘藍(lán)夜蛾中:三個(gè)細(xì)胞色素P450基因均在脂肪體中有最高表達(dá),CYP4M51其次是在前腸和中腸中,CYP6AB56也在中腸有高表達(dá);同時(shí)分析其在甘藍(lán)夜蛾四個(gè)發(fā)育齡期的表達(dá)狀況,結(jié)果發(fā)現(xiàn):甘藍(lán)夜蛾幼蟲(chóng)期三個(gè)細(xì)胞色素P450基因的表達(dá)量隨著齡期的增長(zhǎng)呈現(xiàn)增長(zhǎng)的趨勢(shì),CYP4M51和CYP6AB56五齡表達(dá)量達(dá)到最高,而CYP9A90表達(dá)量在六齡比其他齡期高。3、將溴氰菊酯稀釋成不同濃度處理甘藍(lán)夜蛾后,m RNA表達(dá)量在三個(gè)細(xì)胞色素P450基因中都有所提高,表現(xiàn)為誘導(dǎo)趨勢(shì);CYP4M51表現(xiàn)為低劑量誘導(dǎo),與對(duì)照相比在LD10劑量下表達(dá)量最高,且隨著濃度的增大誘導(dǎo)作用降低;CYP6AB56隨著濃度增大誘導(dǎo)趨勢(shì)更明顯,在LD50劑量下表達(dá)量最高;而CYP9A90則表現(xiàn)為先抑制后誘導(dǎo)的趨勢(shì),在LD30劑量下表達(dá)量最高。甘藍(lán)夜蛾在不同時(shí)間點(diǎn)處理溴氰菊酯(LD10劑量)顯示:三個(gè)甘藍(lán)夜蛾細(xì)胞色素P450基因的mRNA都表現(xiàn)為一定的誘導(dǎo)作用,CYP6AB56呈現(xiàn)先抑制后誘導(dǎo)再抑制的趨勢(shì),在12h誘導(dǎo)表達(dá)量最高;CYP4M51呈現(xiàn)先誘導(dǎo)后抑制的趨勢(shì),但在48h呈現(xiàn)抑制表達(dá)的現(xiàn)象,同樣可以看出在12h出現(xiàn)最高的誘導(dǎo)表達(dá);CYP9A90處理不同時(shí)間后的m RNA表達(dá)一直呈現(xiàn)低劑量誘導(dǎo)的趨勢(shì),在24h誘導(dǎo)表達(dá)量最高。不同齡期甘藍(lán)夜蛾單位體重藥量下處理12h后三個(gè)甘藍(lán)夜蛾細(xì)胞色素P450基因中CYP4M51和CYP6AB56在5齡有最高的誘導(dǎo)表達(dá),這與沒(méi)有用溴氰菊酯處理的不同齡期的相對(duì)表達(dá)量一致,說(shuō)明甘藍(lán)夜蛾5齡細(xì)胞色素P450基因的相對(duì)表達(dá)量最高,而CYP9A90在6齡期經(jīng)溴氰菊酯處理有最高表達(dá)量,這也與之前的結(jié)果相一致。4、對(duì)三個(gè)細(xì)胞色素P450基因沉默以便研究其對(duì)溴氰菊酯代謝中的作用。甘藍(lán)夜蛾分別注射dsCYP4M51、ds CYP6AB56和ds CYP9A90在12-48h與注射ds GFP對(duì)照組相比,CYP4M51、CYP6AB56和CYP9A90 m RNA表達(dá)水平顯著降低,在24h時(shí),三個(gè)細(xì)胞色素P450基因的表達(dá)下降達(dá)到77%,同時(shí)在48h無(wú)明顯回升。注射CYP4M51的ds RNA后再點(diǎn)滴溴氰菊酯其校正死亡率上升了11.4%,同樣注射CYP6AB56的dsRNA后再點(diǎn)滴溴氰菊酯其校正死亡率上升了26.1%,而注射ds CYP9A90后對(duì)溴氰菊酯沒(méi)有顯著性差異。
[Abstract]:The expression of CYP4M51 and CYP6AB56 in four developmental stages of cabbage were studied . The results showed that the expression of CYP4M51 and CYP6AB56 were the highest in five years . The expression level of CYP4M51 , CYP6AB56 and CYP9A90 mRNA was highest after 12 - 48h .

【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S433.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 張?bào)阈?連梅力;李唐;周運(yùn)寧;;山西中部地區(qū)甘藍(lán)夜蛾發(fā)生規(guī)律及為害特點(diǎn)調(diào)查研究[J];山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年04期

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1 蔣紅波;嗜卷書(shū)虱P450基因的分子生物學(xué)特性及其異源表達(dá)研究[D];西南大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1876979