本文選題：甘藍夜蛾 + 細胞色素P450��； 參考：《東北農業(yè)大學》2015年碩士論文

【摘要】：近年來甘藍夜蛾幼蟲為害十分嚴重,對甘藍夜蛾的防治主要是以化學防治為主,其中擬除蟲菊酯類殺蟲劑最為廣泛,這類殺蟲劑的廣泛使用已使昆蟲產生抗藥性,細胞色素P450為昆蟲蟲體內三個參與解毒作用的酶系之一,目前研究主要在與昆蟲抗藥性相關的的CYP4、CYP6和CYP9家族中。本文通過克隆得到一個新的甘藍夜蛾細胞色素P450基因,根據(jù)本實驗室得到的兩條甘藍夜蛾細胞色素P450基因,研究三個細胞色素P450基因序列特征,同時研究其對溴氰菊酯的代謝抗性。主要結果如下:1、CYP9A90基因c DNA序列全長1828bp,Gen Bank登錄號為KR676343,編碼區(qū)長731bp,5′端非編碼序列長度586bp,3′端非編碼序列長度653bp,532個氨基酸被編碼,預測得到蛋白的分子量和等電點分別為61.1k Da和8.84。2、分析在甘藍夜蛾6個不同組織器官中三個細胞色素P450基因的表達狀況,結果發(fā)現(xiàn)在5齡甘藍夜蛾中:三個細胞色素P450基因均在脂肪體中有最高表達,CYP4M51其次是在前腸和中腸中,CYP6AB56也在中腸有高表達;同時分析其在甘藍夜蛾四個發(fā)育齡期的表達狀況,結果發(fā)現(xiàn):甘藍夜蛾幼蟲期三個細胞色素P450基因的表達量隨著齡期的增長呈現(xiàn)增長的趨勢,CYP4M51和CYP6AB56五齡表達量達到最高,而CYP9A90表達量在六齡比其他齡期高。3、將溴氰菊酯稀釋成不同濃度處理甘藍夜蛾后,m RNA表達量在三個細胞色素P450基因中都有所提高,表現(xiàn)為誘導趨勢;CYP4M51表現(xiàn)為低劑量誘導,與對照相比在LD10劑量下表達量最高,且隨著濃度的增大誘導作用降低;CYP6AB56隨著濃度增大誘導趨勢更明顯,在LD50劑量下表達量最高;而CYP9A90則表現(xiàn)為先抑制后誘導的趨勢,在LD30劑量下表達量最高。甘藍夜蛾在不同時間點處理溴氰菊酯(LD10劑量)顯示:三個甘藍夜蛾細胞色素P450基因的mRNA都表現(xiàn)為一定的誘導作用,CYP6AB56呈現(xiàn)先抑制后誘導再抑制的趨勢,在12h誘導表達量最高;CYP4M51呈現(xiàn)先誘導后抑制的趨勢,但在48h呈現(xiàn)抑制表達的現(xiàn)象,同樣可以看出在12h出現(xiàn)最高的誘導表達;CYP9A90處理不同時間后的m RNA表達一直呈現(xiàn)低劑量誘導的趨勢,在24h誘導表達量最高。不同齡期甘藍夜蛾單位體重藥量下處理12h后三個甘藍夜蛾細胞色素P450基因中CYP4M51和CYP6AB56在5齡有最高的誘導表達,這與沒有用溴氰菊酯處理的不同齡期的相對表達量一致,說明甘藍夜蛾5齡細胞色素P450基因的相對表達量最高,而CYP9A90在6齡期經溴氰菊酯處理有最高表達量,這也與之前的結果相一致。4、對三個細胞色素P450基因沉默以便研究其對溴氰菊酯代謝中的作用。甘藍夜蛾分別注射dsCYP4M51、ds CYP6AB56和ds CYP9A90在12-48h與注射ds GFP對照組相比,CYP4M51、CYP6AB56和CYP9A90 m RNA表達水平顯著降低,在24h時,三個細胞色素P450基因的表達下降達到77%,同時在48h無明顯回升。注射CYP4M51的ds RNA后再點滴溴氰菊酯其校正死亡率上升了11.4%,同樣注射CYP6AB56的dsRNA后再點滴溴氰菊酯其校正死亡率上升了26.1%,而注射ds CYP9A90后對溴氰菊酯沒有顯著性差異。
[Abstract]:The expression of CYP4M51 and CYP6AB56 in four developmental stages of cabbage were studied . The results showed that the expression of CYP4M51 and CYP6AB56 were the highest in five years . The expression level of CYP4M51 , CYP6AB56 and CYP9A90 mRNA was highest after 12 - 48h .

【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S433.4

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 張筱秀;連梅力;李唐;周運寧;;山西中部地區(qū)甘藍夜蛾發(fā)生規(guī)律及為害特點調查研究[J];山西農業(yè)大學學報(自然科學版);2008年04期

相關博士學位論文 前1條

1 蔣紅波;嗜卷書虱P450基因的分子生物學特性及其異源表達研究[D];西南大學;2010年

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本文編號：1876979