本文選題：灰霉病菌 + 致病力分化��； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是一類(lèi)廣泛分布的重要病害,而湖北省的地理位置和氣候條件也有利于灰霉病的發(fā)生。本論文對(duì)湖北省灰霉病菌致病力分化情況以及灰霉菌株HBstr-470中的真菌病毒進(jìn)行了研究,取得了如下的研究成果:首先,本研究對(duì)湖北省各地區(qū)保護(hù)地果蔬灰霉病的發(fā)病情況進(jìn)行了調(diào)查采樣,發(fā)現(xiàn)由灰霉病菌引起的果蔬灰霉病在全省范圍內(nèi)發(fā)生十分普遍。從湖北省除神農(nóng)架林區(qū)外的17個(gè)城市采集的灰霉病樣品中共分離到1140株灰霉病菌。通過(guò)菌絲塊接種本氏煙離體葉片的方法測(cè)定了其中942株灰霉病菌的致病力,發(fā)現(xiàn)中強(qiáng)致病力(病斑直徑大于10 mm)灰霉病菌的比例高達(dá)93.94%,而弱致病力菌株(病斑直徑小于等于10 mm)的比例約為6.06%。通過(guò)進(jìn)一步對(duì)弱致病力菌株致病力的重復(fù)測(cè)定,我們最終獲得了15株致病力較弱或無(wú)致病力的灰霉病菌。其次,對(duì)上述15株弱致病力灰霉菌株中的一株弱致病力菌株HBstr-470進(jìn)行了生物學(xué)特性研究。結(jié)果表明,該菌株生長(zhǎng)速率十分緩慢,菌落形態(tài)異常,長(zhǎng)期培養(yǎng)不產(chǎn)菌核,但有較多的氣生菌絲并產(chǎn)生豐富的分生孢子,且分生孢子的萌發(fā)率較高。通過(guò)孢子懸浮液接種本氏煙活體葉片,發(fā)現(xiàn)菌株HBstr-470的分生孢子致病力也較弱,并且在與強(qiáng)致病力菌株B05.10的孢子液混合接種時(shí)產(chǎn)生比B05.10孢子液?jiǎn)为?dú)接種更小的病斑。再次,從弱致病力灰霉菌株HBstr-470的菌絲中檢測(cè)到了5條ds RNA條帶,分別命名為條帶A、B、C、D和E,并對(duì)這5條ds RNA進(jìn)行了序列的克隆和分析。結(jié)果表明,ds RNA-A的大小約為10,000 bp,與Sclerotinia sclerotiorum hypovirus 1的同源關(guān)系較高。ds RNA-B、ds RNA-C和ds RNA-D分別與病毒Rosellinia necatrix quadrivirus 1的片段1、片段3和片段4同源,因此,這三條ds RNA可能屬于同一真菌病毒不同基因組片段,其中ds RNA-C編碼病毒Rd Rp。此外,基于病毒Rd Rp的系統(tǒng)進(jìn)化分析也表明,該病毒與Quadriviridae科病毒成員Rn QV-W1075和Rn QV-W1118,還有Totiviridae科病毒成員Sc V-L-A和Sc V-L-BC的親緣關(guān)系較近。ds RNA-E大小約為2,000 bp,與Rosellinia necatrix partitivirus 5和Sclerotinia sclerotiorum partitivirus S有較高的同源關(guān)系。因此,弱致病力灰霉菌株HBstr-470可能被多種病毒復(fù)合侵染,分別屬于Hypoviridae、Quadriviridae和Partitiviridae這三個(gè)科。最后,通過(guò)原生質(zhì)體融合技術(shù)獲得了一株灰霉菌株HBstr-470與灰霉菌株B05.10(01868)原生質(zhì)體融合后的子代菌株B05.10(W1),該菌株培養(yǎng)形態(tài)異常,產(chǎn)生大量氣生菌絲和分生孢子,且生長(zhǎng)十分緩慢,這與灰霉菌株HBstr-470的培養(yǎng)形態(tài)較為一致。
[Abstract]:Botrytis cinerea) is a kind of important disease which is widely distributed, and the geographical location and climatic conditions of Hubei Province are also conducive to the occurrence of gray mold disease. In this paper, the pathogenicity differentiation of cinerea in Hubei Province and the fungal virus in HBstr-470 were studied. The results are as follows: first of all, In this study, the incidence of grey mold of fruits and vegetables in protected areas of Hubei Province was investigated and sampled, and it was found that the occurrence of grey mold of fruits and vegetables caused by cinerea cinerea was very common in the whole province. A total of 1140 strains of Botrytis cinerea were isolated from 17 cities in Hubei Province except Shennongjia forest area. The pathogenicity of 942 strains of Botrytis cinerea was determined by inoculating the leaves of Bensi tobacco in vitro. It was found that the proportion of moderately virulent (disease spot diameter > 10 mm) was 93.94, while that of weakly virulent strain (less than 10 mm) was about 6.06 mm. Through the repeated determination of the pathogenicity of the weakly pathogenic strains, we finally obtained 15 strains of grey mold with weak pathogenicity or no pathogenicity. Secondly, the biological characteristics of one of the 15 weakly virulent strains of Aspergillus virulence (HBstr-470) were studied. The results showed that the growth rate of the strain was very slow, the colony morphology was abnormal, and no sclerotia was produced in long-term culture, but there were more airborne hyphae and abundant conidia, and the germination rate of conidia was higher. It was found that the virulence of conidia of strain HBstr-470 was also weak when inoculated with the spore suspension of B05.10, and the disease spot was smaller than that of B05.10 when inoculated with the spore liquid of strong virulent strain B05.10. Thirdly, five DS RNA bands were detected from the hyphae of the weakly virulent Aspergillus strain HBstr-470, named as the band Acarinobium C (D) and the band E, respectively, and the five DS RNA were cloned and analyzed. The results showed that the size of DS RNA-A was about 10000 BP, and the homology with Sclerotinia sclerotiorum hypovirus 1 was higher. DS RNA-Bds RNA-C and DS RNA-D were homologous to Rosellinia necatrix quadrivirus 1 fragment 1, fragment 3 and fragment 4, respectively. These three DS RNA may belong to different genome fragments of the same fungal virus, among which DS RNA-C encodes Rd Rp. In addition, phylogenetic analysis based on virus RRd p also showed that, The relationship between this virus and Rn QV-W1075 and rn QV-W1118 of Quadriviridae family, and that of SC V-L-A and SC V-L-BC of Totiviridae family is about 2000 BP, which has high homology with Rosellinia necatrix partitivirus 5 and Sclerotinia sclerotiorum partitivirus S. Therefore, HBstr-470 may be infected by multiple viruses, belonging to three families: Hypoviridaeae Quadriviridae and Partitiviridae. Finally, the protoplast fusion technique was used to obtain a strain of Aspergillus cinerea (HBstr-470) fused with Ash strain B05.10101868). The strain B05.10W1 was cultured in abnormal morphology and produced a large number of airborne hyphae and conidia, and the growth was very slow. This was consistent with the culture morphology of HBstr-470.
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S432.44

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本文編號(hào)：1837468