本文選題：蝗綠僵菌　切入點：幾丁質合成酶家族　出處：《重慶大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：隨著現(xiàn)代分子生物學技術的不斷發(fā)展,有關昆蟲病原真菌致病機理的研究越來越深入�；染G僵菌是目前研究比較廣的一類昆蟲病原真菌,可以作為研究昆蟲病原真菌的模式生物。幾丁質是真菌細胞壁的重要組成部分,幾丁質合成的關鍵酶是幾丁質合酶(CHS)。在絲狀真菌中,幾丁質合成酶家族基因分為七類。目前,有關昆蟲病原真菌幾丁質合成酶家族基因的研究還未見報道。所以本研究以昆蟲病原真菌蝗綠僵菌為研究對象,研究蝗綠僵菌幾丁質合成酶家族基因Ma Chs,闡明Ma Chs家族各基因在蝗綠僵菌抗逆和侵染致病過程中的作用。本研究的主要研究結果如下:①蝗綠僵菌Ma Chs家族有七個基因,分別命名為Ma Chs I、Ma Chs II、Ma Chs III、Ma Chs IV、Ma Chs V、Ma Chs VI、Ma Chs VII。②通過q RT-PCR測定Ma Chs家族各基因在侵染過程中的表達量。除5天蟲菌體中Ma Chs VII表達量最高,其余各時期均是Ma Chs III相對表達量最高,Ma Chs VI在各時期相對表達量最低;比較同一基因在不同時期的表達量,Ma Chs II在附著胞時期相對表達量最高,其他各基因均在孢子時期相對表達量最高。③在1/4SDAY固體培養(yǎng)基加入各種逆境,ΔMa Chs III、ΔMa Chs V在CR、CFW和H2O2條件下,長勢弱于野生型,ΔMa Chs VII在CR、CFW、H2O2、SDS、SOR、Na Cl逆境及1/4SDAY空白對照中長勢均弱于野生型,其他敲除菌株在逆境下與野生型沒有差異。敲除Ma Chs II、Ma Chs III、Ma Chs IV、Ma Chs V和Ma Chs VI影響蝗綠僵菌對濕熱的敏感性,敲除Ma Chs II、Ma Chs IV、Ma Chs VI影響蝗綠僵菌對紫外的敏感性,ΔMa Chs I對紫外濕熱的敏感性與野生型無差異。④分析Ma Chs家族各基因對蝗綠僵菌產孢量和萌發(fā)的影響。結果顯示,除ΔMa Chs I外,其他敲除菌株產孢量均比野生型低,其中ΔMa Chs VII產孢量急劇降低。統(tǒng)計萌發(fā)率顯示ΔMa Chs I、ΔMa Chs IV萌發(fā)中時延遲;ΔMa Chs II、ΔMa Chs III、ΔMa Chs V萌發(fā)中時提前,ΔMa Chs VI萌發(fā)中時與野生型相比沒有顯著差異。⑤通過點滴和注射分析各基因敲除后對蝗綠僵菌毒力的影響。結果顯示ΔMa Chs III點滴和注射接種蝗蟲,毒力均降低。研究發(fā)現(xiàn),ΔMa Chs V注射毒力升高,ΔMa Chs VII注射毒力喪失,其余各基因對蝗綠僵菌毒力沒有影響。⑥通過透射電鏡觀察Ma Chs家族各基因敲除后對蝗綠僵菌細胞壁的影響,結果顯示敲除菌株細胞壁與野生型有一定的差異,敲除菌株細胞壁變厚。
[Abstract]:With the development of modern molecular biology technology, the pathogenic mechanism of entomopathogenic fungi has been studied more and more deeply. Metarhizium anisopliae is a kind of insect pathogenic fungi. It can be used as a model organism to study entomopathogenic fungi. Chitin is an important part of the cell wall of fungi, and the key enzyme for chitin synthesis is chitin synthase (CHS). In filamentous fungi, the genes of chitin synthase family are classified into seven categories. Studies on chitinase family genes of entomopathogenic fungi have not been reported. To study the genes of chitin synthase family of Metarhizium anisopliae Ma, and to elucidate the role of Ma Chs family genes in the process of resistance to stress and infection and pathogenicity of Metarhizium anisopliae. The main results of this study are as follows: 1. There are seven genes in the Ma Chs family of Metarhizium anisopliae. They were named as Ma Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs VII.2, respectively. The expression of Ma Chs VII in the Ma Chs family was determined by Q RT-PCR, except for 5 days, the highest expression was found in Ma Chs VII. The highest relative expression of Ma Chs III and the lowest relative expression of Ma Chs VI were observed in other periods, and the highest relative expression of Ma Chs II was observed at different stages. The relative expression of other genes was highest in spore stage. 3. 3. All the stresses were added to 1/4SDAY solid medium. 螖 Ma Chs III, 螖 Ma Chs V were weaker than wild type in CRF CFW and H2O2, and 螖 Ma Chs VII were weaker than wild type in CRT CFW H 2O 2 SDSS-SORN NaCl stress and 1/4SDAY blank control. Other knockout strains had no difference from wild type under stress. Knockout of Ma Chs III Chs Ma Chs IVP Ma Chs V and Ma Chs VI affected susceptibility of Metarhizium anisopliae to moisture and heat. Knockout Ma Chs II, Ma Chs IVF Ma Chs VI affected the UV sensitivity of Metarhizium anisopliae. There was no difference between the sensitivity of 螖 Ma Chs I to ultraviolet dampness heat and wild type. 4. The effect of Ma Chs family genes on sporulation and germination of Metarhizium anisopliae was analyzed. The results showed that, except for 螖 Ma Chs I, there was no difference between the two genes. The sporulation of other knockout strains was lower than that of wild type. The spore production of 螖 Ma Chs VII decreased sharply. The statistical germination rate showed that the germination time of 螖 Ma Chs I, 螖 Ma Chs IV was delayed, that of 螖 Ma Chs II, 螖 Ma Chs III, 螖 Ma Chs V was earlier, and there was no significant difference between 螖 Ma Chs VI and wild type. The effect of gene knockout on the virulence of Metarhizium anisopliae was analyzed. The results showed that 螖 Ma Chs III was given by drip and inoculated with locust. The virulence of 螖 Ma Chs V was increased, and the toxicity of 螖 Ma Chs VII was lost. The other genes had no effect on the virulence of Metarhizium anisopliae by transmission electron microscope (TEM). The effect on the cell wall of Metarhizium anisopliae was observed after the gene knockout of Ma Chs family. The results showed that the cell wall of the knockout strain was different from that of the wild type, and the cell wall of the knockout strain became thicker.
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S476.12

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