本文關(guān)鍵詞：苜蓿夜蛾葡萄糖氧化酶cDNA的克隆、表達(dá)及特性研究

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【摘要】：【目的】從苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca體內(nèi)克隆葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOX)基因cDNA序列,并進(jìn)行原核表達(dá)及活性測(cè)定。同時(shí)對(duì)GOX在不同組織的特異表達(dá)及對(duì)葡萄糖誘導(dǎo)反應(yīng)的特性進(jìn)行研究�！痉椒ā恳攒俎Ｒ苟隇椴牧咸崛】俁NA,利用RT-PCR和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù),擴(kuò)增苜蓿夜蛾GOX基因全長(zhǎng)cDNA序列。利用原核表達(dá)載體p ET-21b在大腸桿菌中表達(dá)苜蓿夜蛾的GOX基因,并用Ni-NTA親和層析柱將帶His-tag的目的蛋白進(jìn)行純化,再利用梯度透析法進(jìn)行復(fù)性,以葡萄糖為底物進(jìn)行酶的活性測(cè)定。同時(shí)利用Real-time PCR分析GOX的組織特異性表達(dá)和對(duì)葡萄糖的誘導(dǎo)反應(yīng)�！窘Y(jié)果】該cDNA序列有2 154個(gè)堿基,開(kāi)放閱讀框1 824個(gè)堿基,編碼607個(gè)氨基酸組成的多肽,分子量為67.04 ku,多肽的等電點(diǎn)為5.13。該序列命名為Hv GOX,在Gen Bank的登錄號(hào)為KT907054。序列分析表明,Hv GOX的氨基酸序列與其他昆蟲(chóng)的GOX氨基酸序列高度同源。該基因在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中成功地進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)出與預(yù)測(cè)的蛋白分子量相符的融合蛋白。由原核表達(dá)載體表達(dá)后的蛋白經(jīng)過(guò)變性、純化和復(fù)性后有活性。Real-time PCR結(jié)果表明,該基因在苜蓿夜蛾的不同組織均有m RNA水平的特異表達(dá),其中在唾腺中的表達(dá)量最高;同時(shí)用0.01%、0.1%、1%和10%葡萄糖溶液浸泡的大豆葉喂食的幼蟲(chóng),幼蟲(chóng)體內(nèi)的GOX的表達(dá)均被誘導(dǎo),且在10%的濃度時(shí)誘導(dǎo)表達(dá)量最高�！窘Y(jié)論】本研究在苜蓿夜蛾體內(nèi)獲得一個(gè)新的葡萄糖氧化酶基因,該結(jié)果為進(jìn)一步研究葡萄糖氧化酶在昆蟲(chóng)體內(nèi)的生物功能奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 苜蓿夜蛾 葡萄糖氧化酶 克隆 表達(dá) 酶活性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31201548) 山西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013011028-3)
【分類(lèi)號(hào)】：S433.4
【正文快照】： 葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOX),是氧化還原型酶(EC1.1.3.4),它能夠?qū)Ｒ坏刈R(shí)別β-D-葡萄糖并將其氧化分解成葡萄糖酸內(nèi)酯和過(guò)氧化氫,而葡萄糖酸內(nèi)酯會(huì)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸,過(guò)氧化氫則最終會(huì)轉(zhuǎn)變成水和氧氣(Ramzanand Mehmood,2009)。葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖的分解機(jī)制存

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 慕衛(wèi),吳孔明,梁革梅,張文吉;苜蓿夜蛾人工飼養(yǎng)技術(shù)[J];農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

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本文編號(hào)：1024519