本文關(guān)鍵詞：DREB1B基因在轉(zhuǎn)基因小麥后代的穩(wěn)定表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《西北農(nóng)林科技大學(xué)》 2014年

長武134小麥GAPDH基因過表達載體的構(gòu)建及擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化

張陽璞  

【摘要】：小麥(Triticum aestivum)，禾本科小麥屬，，是總產(chǎn)量僅次于玉米（Zea mays）的大宗糧食作物，在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有非常重要的地位。干旱是影響我國北方地區(qū)小麥正常生產(chǎn)的一個嚴(yán)重問題，尋找并培育具有一定抗旱能力的農(nóng)作物新品種是我國農(nóng)業(yè)科學(xué)家需要解決的重大課題。GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，三磷酸甘油醛脫氫酶）基因通常被認為是持家基因，幾乎在所有組織或細胞中都能高水平表達，故被廣泛用作生物組織中基因表達量研究的標(biāo)準(zhǔn)化內(nèi)參。但近年來研究發(fā)現(xiàn)，其在某些組織和部位中表達量并不是穩(wěn)定不變的。本實驗室在以小麥抗旱品種長武134為試驗材料的研究中發(fā)現(xiàn)該小麥品種的GAPDH蛋白在受到干旱脅迫時其表達量上升，而且與不抗旱的品種相比更高，因此我們認為GAPDH蛋白參與了小麥的抗旱作用。本文同樣選取抗旱性較強的小麥品種長武134為材料，提取-1.2MPaPEG6000處理過48h的小麥幼芽的RNA，反轉(zhuǎn)錄得到了其cDNA序列，通過PCR克隆得到GAPDH基因，采用傳統(tǒng)的酶切連接的方法構(gòu)建了GAPDH基因的過表達載體pTCK303-GAPDH，并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸染花序法遺傳轉(zhuǎn)化了擬南芥（Arabidopsis thaliana）。 實驗結(jié)果如下： 實驗中采用Trizol法提取小麥幼芽的總RNA，提取的-1.2MPaPEG6000處理48h的長武134小麥的總RNA完整性較好，反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，以cDNA為模板進行PCR擴增，構(gòu)建pTCK303-GAPDH過表達載體，將載體送出測序，測序結(jié)果已知序列GAPC（code：EF592180.1）相似度為99.7%，表明載體構(gòu)建成功。 通過在人工氣候培養(yǎng)箱的種植過程，確定了擬南芥的培養(yǎng)條件：在光照條件下光照強度8800~13200lx，時間/溫度為16h/22℃，黑暗條件下時間/溫度為8h/20℃，保持培養(yǎng)箱的濕度70%。 完成表達載體構(gòu)建后，將表達載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中，采用農(nóng)桿菌侵染花序法完成了對擬南芥進行了遺傳轉(zhuǎn)化，并收獲種子。 篩選轉(zhuǎn)基因擬南芥需要確定所采用抗生素的濃度，本文通過兩次重復(fù)的實驗，確定了利用卡那霉素篩選轉(zhuǎn)基因擬南芥的適宜濃度為50mg/L。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：Q943.2
【目錄】：

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