本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化及基因工程雄性不育系初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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博士論文    

農(nóng)桿菌介導(dǎo)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化及基因工程雄性不育系初步研究

     論文目錄

英文縮寫與中英文擴(kuò)展名第1-10頁(yè)

中文摘要第10-12頁(yè)

ABSTRACT第12-14頁(yè)

第一部分 文獻(xiàn)綜述第14-45頁(yè)

 1 玉米遺傳轉(zhuǎn)化研究綜述第14-27頁(yè)

   ·植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法、原理及優(yōu)缺點(diǎn)第14-19頁(yè)

     ·基因槍轉(zhuǎn)化法第14-15頁(yè)

     ·農(nóng)桿菌介導(dǎo)法第15-17頁(yè)

     ·花粉管通道法第17-18頁(yè)

     ·聚乙二醇介導(dǎo)法第18頁(yè)

     ·電擊法第18-19頁(yè)

     ·脂質(zhì)體介導(dǎo)法第19頁(yè)

   ·農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米遺傳轉(zhuǎn)化的研究歷程第19-22頁(yè)

   ·影響玉米遺傳轉(zhuǎn)化的一些關(guān)鍵因素第22-27頁(yè)

     ·玉米遺傳轉(zhuǎn)化中不同受體再生體系的建立第22-24頁(yè)

       ·不同受體材料對(duì)玉米再生的影響第22-23頁(yè)

       ·基因型對(duì)玉米體細(xì)胞再生能力的影響第23頁(yè)

       ·培養(yǎng)條件對(duì)玉米體細(xì)胞再生能力的影響第23-24頁(yè)

     ·受體材料、生長(zhǎng)狀況及基因型對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響第24頁(yè)

     ·不同的培養(yǎng)基成分對(duì)玉米遺傳轉(zhuǎn)化的影響第24-26頁(yè)

       ·基本培養(yǎng)基對(duì)玉米遺傳轉(zhuǎn)化的影響第24-25頁(yè)

       ·培養(yǎng)基中附加其它物質(zhì)對(duì)玉米遺傳轉(zhuǎn)化的影響第25-26頁(yè)

     ·農(nóng)桿菌菌株及載體對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響第26頁(yè)

     ·選擇性標(biāo)記基因?qū)z傳轉(zhuǎn)化的影響第26-27頁(yè)

     ·其它因素的影響第27頁(yè)

 2 植物啟動(dòng)子研究概況第27-33頁(yè)

   ·高等植物啟動(dòng)子的分類和結(jié)構(gòu)第27-30頁(yè)

     ·高等植物啟動(dòng)子的類別第27-29頁(yè)

       ·組成型啟動(dòng)子第28頁(yè)

       ·組織或器官特異性啟動(dòng)子第28頁(yè)

       ·誘導(dǎo)型啟動(dòng)子第28-29頁(yè)

     ·高等植物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征第29-30頁(yè)

       ·轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)第29頁(yè)

       ·TATA-box第29-30頁(yè)

       ·CAAT-box第30頁(yè)

       ·G-box第30頁(yè)

       ·增強(qiáng)子和沉默子第30頁(yè)

   ·煙草中與花發(fā)育有關(guān)啟動(dòng)子的研究現(xiàn)狀第30-32頁(yè)

     ·煙草花藥特異表達(dá)啟動(dòng)子第31頁(yè)

     ·煙草花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子第31-32頁(yè)

   ·Zm13基因啟動(dòng)子的研究現(xiàn)狀第32頁(yè)

   ·啟動(dòng)子研究與作物雄性不育第32-33頁(yè)

 3 基因工程創(chuàng)建雄性不育系研究概況第33-45頁(yè)

   ·植物雄性不育(male sterility)的類型及遺傳機(jī)制第33-36頁(yè)

     ·細(xì)胞核不育型(GMS)第34頁(yè)

       ·隱性核不育第34頁(yè)

       ·顯性核不育第34頁(yè)

     ·細(xì)胞質(zhì)雄性不育型(CMS)第34-36頁(yè)

       ·孢子體細(xì)胞質(zhì)雄性不育第35頁(yè)

       ·配子體細(xì)胞質(zhì)雄性不育第35-36頁(yè)

   ·基因工程創(chuàng)建雄性不育系的研究進(jìn)展第36-41頁(yè)

     ·破壞花粉或花藥的正常發(fā)育創(chuàng)造雄性不育性狀第36-39頁(yè)

       ·Mariani雄性不育系統(tǒng)(barnase／barstar—bar系統(tǒng))第37-38頁(yè)

       ·通過提早降解胼胝質(zhì)獲得植物雄性不育系第38-39頁(yè)

       ·噴施外源物質(zhì)誘導(dǎo)產(chǎn)生植物雄性不育第39頁(yè)

       ·通過其它細(xì)胞毒素創(chuàng)建雄性不育第39頁(yè)

     ·利用反義基因技術(shù)創(chuàng)造雄性不育性狀第39-40頁(yè)

     ·通過共抑制創(chuàng)造雄性不育第40-41頁(yè)

     ·通過細(xì)菌影響小孢子發(fā)育引起雄性不育第41頁(yè)

   ·argE基因及其應(yīng)用研究進(jìn)展第41-45頁(yè)

第二部分 研究?jī)?nèi)容第45-113頁(yè)

 第一章 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米胚性愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化研究第45-73頁(yè)

  第一節(jié) 本研究的目的、意義及內(nèi)容第45-46頁(yè)

   1 本研究的背景、目的及意義第45-46頁(yè)

   2 研究?jī)?nèi)容第46頁(yè)

  第二節(jié) 材料與方法第46-54頁(yè)

   1 實(shí)驗(yàn)材料第46-49頁(yè)

   ·供試玉米材料第46頁(yè)

   ·菌株及質(zhì)粒第46-47頁(yè)

   ·重要試劑、耗材及其它材料第47頁(yè)

   ·各種培養(yǎng)基及成分第47-49頁(yè)

     ·玉米培養(yǎng)基母液配方第47-48頁(yè)

     ·玉米愈傷誘導(dǎo)及后期培養(yǎng)培養(yǎng)基成分第48頁(yè)

     ·玉米愈傷侵染過程所用培養(yǎng)基成分第48-49頁(yè)

   2 實(shí)驗(yàn)方法第49-54頁(yè)

   ·農(nóng)桿菌菌株的準(zhǔn)備第49頁(yè)

   ·玉米胚性愈傷的獲得及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化第49-51頁(yè)

     ·玉米胚性愈傷的誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)第49-50頁(yè)

     ·農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化流程第50-51頁(yè)

       ·農(nóng)桿菌侵染液的準(zhǔn)備第50頁(yè)

       ·愈傷侵染第50頁(yè)

       ·抗性愈傷的篩選及再生第50-51頁(yè)

   ·玉米愈傷及轉(zhuǎn)基因植株葉片的GUS表達(dá)分析第51-52頁(yè)

     ·GUS染色液的配制第51-52頁(yè)

     ·愈傷GUS瞬時(shí)表達(dá)率分析第52頁(yè)

     ·轉(zhuǎn)基因植株葉片GUS染色第52頁(yè)

   ·玉米抗性愈傷率分析第52頁(yè)

   ·轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)第52-53頁(yè)

     ·玉米葉片DNA微量提取法第52-53頁(yè)

     ·抗性植株的PCR檢測(cè)第53頁(yè)

   ·玉米胚性愈傷對(duì)潮霉素抗性臨界濃度的決定第53-54頁(yè)

  第三節(jié) 結(jié)果與分析第54-66頁(yè)

   1 玉米胚性愈傷對(duì)潮霉素抗性臨界濃度的決定第54-55頁(yè)

   2 不同菌株及愈傷材料對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響第55-57頁(yè)

   3 不同侵染時(shí)間對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響第57-58頁(yè)

   4 不同菌液(侵染液)濃度對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響第58-59頁(yè)

   5 侵染液中不同濃度Tween 20對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響第59-60頁(yè)

   6 不同共培養(yǎng)溫度對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響第60-61頁(yè)

   7 不同共培養(yǎng)pH值對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化的影響第61-62頁(yè)

   8 共培養(yǎng)基中不同濃度乙酰丁香酮對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率影響第62-63頁(yè)

   9 共培養(yǎng)基中不同濃度L—半胱氨酸對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響第63-64頁(yè)

   10 共培養(yǎng)基中不同濃度二硫基蘇糖醇對(duì)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響第64-65頁(yè)

   11 T_0代轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)及葉片的GUS表達(dá)分析第65-66頁(yè)

  第四節(jié) 討論第66-72頁(yè)

   1 潮霉素篩選濃度對(duì)轉(zhuǎn)基因愈傷存活率的影響第66頁(yè)

   2 農(nóng)桿菌菌株類型對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響第66-67頁(yè)

   3 農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響第67-68頁(yè)

   4 農(nóng)桿菌侵染液濃度和侵染時(shí)間對(duì)愈傷轉(zhuǎn)化的影響第68頁(yè)

   5 共培養(yǎng)環(huán)境對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響第68-70頁(yè)

   ·pH值第69頁(yè)

   ·溫度第69-70頁(yè)

   6 表面活性劑和抗氧化劑在愈傷遺傳轉(zhuǎn)化中的作用第70-71頁(yè)

   7 玉米遺傳轉(zhuǎn)化過程中陽(yáng)性轉(zhuǎn)化細(xì)胞和再生植株的一致性第71-72頁(yè)

  第五節(jié) 小結(jié)第72-73頁(yè)

 第二章 玉米花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子Zm13的分離及功能鑒定、煙草花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子序列NTPp13的分離、結(jié)構(gòu)特征及時(shí)空表達(dá)分析第73-101頁(yè)

  第一節(jié) 本研究背景、目的意義及技術(shù)路線第73-76頁(yè)

   1 本研究背景第73-74頁(yè)

   2 本研究目的及意義第74-75頁(yè)

   ·對(duì)Zm13啟動(dòng)子活性檢測(cè)第74頁(yè)

   ·對(duì)野生型煙草中NTPp13序列的功能鑒定第74-75頁(yè)

   3 本研究的技術(shù)路線第75-76頁(yè)

  第二節(jié) 材料與方法第76-91頁(yè)

   1 實(shí)驗(yàn)材料第76-77頁(yè)

   ·植物材料第76頁(yè)

   ·菌株及質(zhì)粒第76頁(yè)

   ·重要試劑、耗材及其它材料第76頁(yè)

   ·培養(yǎng)基及成分第76-77頁(yè)

   2 實(shí)驗(yàn)辦法第77-91頁(yè)

   ·玉米花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子Zm13及煙草特異表達(dá)片段NTPp13的獲得第77-78頁(yè)

     ·玉米葉片和煙草葉片DNA微量提取法第77頁(yè)

     ·玉米中Zm13啟動(dòng)子及煙草中NTPp13片段的PCR擴(kuò)增第77-78頁(yè)

   ·玉米啟動(dòng)子Zm13及煙草啟動(dòng)子片段NTPp13表達(dá)載體構(gòu)建第78-83頁(yè)

     ·PCR產(chǎn)物回收與純化第78-79頁(yè)

     ·目的片段與T載體連接第79頁(yè)

     ·CaCl_2法制備大腸桿菌DH5α感受態(tài)第79-80頁(yè)

     ·藍(lán)白斑篩選平板的制備第80頁(yè)

     ·熱激轉(zhuǎn)化法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌第80頁(yè)

     ·轉(zhuǎn)化子的鑒定第80頁(yè)

     ·細(xì)菌培養(yǎng)、收集以及堿裂解法提取質(zhì)粒DNA第80-81頁(yè)

     ·聚乙二醇法沉淀純化質(zhì)粒DNA第81-82頁(yè)

     ·質(zhì)粒及載體的酶切第82-83頁(yè)

     ·Zm13及NTPp13片段與載體pBI121連接第83頁(yè)

     ·熱激法將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α感受態(tài)以及轉(zhuǎn)化子的鑒定第83頁(yè)

     ·三親交配法將表達(dá)載體pBI121—Zm13(或NTPp13)導(dǎo)入農(nóng)桿菌第83頁(yè)

   ·農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化煙草第83-84頁(yè)

   ·轉(zhuǎn)基因煙草繼代及移栽第84頁(yè)

   ·轉(zhuǎn)Zm13啟動(dòng)子煙草植株的PCR檢測(cè)及Zm13啟動(dòng)子活性鑒定第84-85頁(yè)

     ·轉(zhuǎn)Zm13啟動(dòng)子煙草葉片DNA微量提取法及GUS染色液的配制第84頁(yè)

     ·轉(zhuǎn)Zm13啟動(dòng)子抗性煙草植株的PCR檢測(cè)第84-85頁(yè)

     ·Zm13啟動(dòng)子的活性鑒定第85頁(yè)

   ·轉(zhuǎn)NTPp13-GUS煙草植株的分子檢測(cè)第85-90頁(yè)

     ·轉(zhuǎn)NTPp13-GUS抗性煙草植株的PCR檢測(cè)第85頁(yè)

     ·轉(zhuǎn)NTPp13-GUS煙草植株的PCR—Southern檢測(cè)第85-90頁(yè)

       ·探針DNA序列的獲得第85頁(yè)

       ·轉(zhuǎn)基因煙草植株的PCR—Southern檢測(cè)第85-90頁(yè)

   ·NTPp13片段的啟動(dòng)子活性驗(yàn)證及時(shí)空特異表達(dá)第90-91頁(yè)

     ·NTPp13片段在煙草花藥中的活性驗(yàn)證第90頁(yè)

     ·NTPp13片段的特異表達(dá)部位鑒定第90頁(yè)

     ·不同花期NTPp13—GUS表達(dá)量分析第90-91頁(yè)

     ·NTPp13片段啟動(dòng)子活性對(duì)溫度影響的穩(wěn)定性分析第91頁(yè)

     ·GUS活性熒光定量方法第91頁(yè)

  第三節(jié) 結(jié)果與分析第91-98頁(yè)

   1 玉米花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子Zm13的分離及活性鑒定第91-94頁(yè)

   ·Zm13啟動(dòng)子的分離第91-92頁(yè)

   ·Zm13啟動(dòng)子活性鑒定第92-94頁(yè)

   2 煙草花粉特異表達(dá)序列NTPp13的結(jié)構(gòu)和功能分析第94-98頁(yè)

   ·NTPp13序列的結(jié)構(gòu)分析第94-95頁(yè)

   ·轉(zhuǎn)NTPp13-GUS煙草植株的分子檢測(cè)第95-96頁(yè)

   ·NTPp13序列的啟動(dòng)子活性驗(yàn)證及時(shí)空特異表達(dá)第96-98頁(yè)

   ·NTPp13啟動(dòng)子片段對(duì)溫度改變的穩(wěn)定性分析第98頁(yè)

  第四節(jié) 討論第98-100頁(yè)

   1 玉米花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子Zm13在創(chuàng)建雄性不育系中的應(yīng)用第98-99頁(yè)

   2 對(duì)NTPp13啟動(dòng)子序列的研究及意義第99-100頁(yè)

  第五節(jié) 小結(jié)第100-101頁(yè)

 第三章 基因工程創(chuàng)建玉米雄性不育系的初步研究第101-113頁(yè)

  第一節(jié) 本研究目的、意義及技術(shù)路線第101頁(yè)

   1 本研究目的及意義第101頁(yè)

   2 本研究的技術(shù)路線第101頁(yè)

  第二節(jié) 材料與方法第101-107頁(yè)

   1 實(shí)驗(yàn)材料第101-104頁(yè)

   ·植物材料第101-102頁(yè)

   ·菌株及質(zhì)粒第102頁(yè)

   ·重要試劑、耗材及其它材料第102頁(yè)

   ·培養(yǎng)基及成分第102-104頁(yè)

   2 實(shí)驗(yàn)方法第104-107頁(yè)

   ·脫乙酰酶基因argE的獲得第104-105頁(yè)

     ·大腸桿菌菌株基因組的提取第104頁(yè)

     ·argE基因的獲得第104-105頁(yè)

   ·玉米花粉特異表達(dá)啟動(dòng)子Zm13的獲得第105頁(yè)

   ·玉米表達(dá)載體p1300-Zm13-argE的構(gòu)建第105-106頁(yè)

   ·玉米幼胚及胚性愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化第106頁(yè)

     ·農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化第106頁(yè)

     ·農(nóng)桿菌介導(dǎo)的幼胚的遺傳轉(zhuǎn)化第106頁(yè)

   ·轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)第106-107頁(yè)

     ·抗性植株的PCR檢測(cè)第106-107頁(yè)

     ·PCR陽(yáng)性植株的PCR-Southern檢測(cè)第107頁(yè)

       ·雜交探針的獲得第107頁(yè)

       ·PCR-Southern雜交過程第107頁(yè)

  第三節(jié) 結(jié)果與分析第107-110頁(yè)

   1 脫乙酰酶基因argE的獲得第107-108頁(yè)

   2 玉米表達(dá)載體p1300-Zm13-argE的構(gòu)建第108頁(yè)

   3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化第108-109頁(yè)

   4 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)第109-110頁(yè)

  第四節(jié) 討論第110-112頁(yè)

   1 通過花粉特異啟動(dòng)子創(chuàng)建雄性不育系第110-111頁(yè)

   2 通過外施N-乙酰-草丁膦誘導(dǎo)轉(zhuǎn)argE基因植株雄性不育系策略的優(yōu)缺點(diǎn)第111-112頁(yè)

  第五節(jié) 小結(jié)第112-113頁(yè)

參考文獻(xiàn)第113-125頁(yè)

致謝第125-126頁(yè)

論文編號(hào)BS1148850，這篇論文共126頁(yè)
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  本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)玉米愈傷遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化及基因工程雄性不育系初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。