本文關(guān)鍵詞：FABP4轉(zhuǎn)基因牛的分子生物學鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

中國農(nóng)業(yè)科學 2014,47 24 :4895-4903 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.24.013 FABP4轉(zhuǎn)基因牛的分子生物學鑒定 1 1 3 2 1 1 1 1 1 1 趙敬賢 ，李 娟 ，嚴興榮 ，倪和民 ，陳 燕 ，張路培 ，高會江 ，許尚忠 ，李俊雅 ，高 雪 1 2 3 （中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193 ； 北京農(nóng)學院動物科學技術(shù)學院，北京 102206 ； 西北大學，西安 710068 ） 摘要：【目的】對前期獲得的 3 頭轉(zhuǎn)基因牛進行分子生物學評價，包括轉(zhuǎn)基因陽性鑒定、基因及蛋白表達水 平的檢測，旨在進一步為轉(zhuǎn)基因牛的安全評價提供一些科學依據(jù)�！痉椒ā扛鶕�(jù) GenBank 上公布的牛 FABP4 基因 （GenBank登錄號：NM_174314）mRNA序列，利用兼并密碼子對現(xiàn)有FABP4 基因進行突變，并構(gòu)建了pEGFP-C1-FABP4 真核表達載體、通過細胞轉(zhuǎn)染、體細胞核移植、胚胎移植技術(shù)獲得 3 頭轉(zhuǎn)基因牛；分別采集了 1 號轉(zhuǎn)基因牛不同 組織樣，2、3 號轉(zhuǎn)基因牛與野生型個體 8、10、12、14 月齡的血液樣本，利用 RT-PCR 技術(shù)對所獲轉(zhuǎn)基因個體的 陽性與否進行了鑒定；同時利用熒光定量PCR技術(shù)檢測了1 號轉(zhuǎn)基因牛不同組織中外源性FABP4基因的表達情況， 并分析了2、3 號轉(zhuǎn)基因牛在8―14月齡之間，外源性FABP4基因、內(nèi)源性FABP4基因的變化趨勢，并通過疊加轉(zhuǎn) 基因牛外源與內(nèi)源性 FABP4 基因的表達量，分析了轉(zhuǎn)基因牛和非轉(zhuǎn)基因牛 FABP4 基因的整體表達水平差異；通過 Western blotting 技術(shù)分析了 3 頭轉(zhuǎn)基因牛外源性 FABP4 基因的蛋白表達水平�！窘Y(jié)果】①對所獲得的 3 頭轉(zhuǎn)基 因牛RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，3頭轉(zhuǎn)基因個體各樣本均在205 bp 處產(chǎn)生條帶，而妊娠母牛及陰性對照在205 bp處均未 有條帶出現(xiàn)，初步表明 3 頭轉(zhuǎn)基因牛均為轉(zhuǎn)基因陽性。②實時定量 PCR 檢測表明，，1 號轉(zhuǎn)基因牛

  本文關(guān)鍵詞：FABP4轉(zhuǎn)基因牛的分子生物學鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。