本文關(guān)鍵詞：蘭州鲇GH和MSTN基因多態(tài)性及生長相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： 蘭州鲇(Silurus lanzhouensis) 生長激素基因 肌肉抑制素基因 生長性狀 SNPs

【摘要】：本研究選取同一家系同一混養(yǎng)池100條蘭州鲇為實驗材料,對2個生長相關(guān)的候選基因生長激素(GH)基因和肌肉生長抑制素(MSTN)基因進行研究,采用測序和單鏈構(gòu)象多態(tài)(SSCP)的分析方法,對蘭州鲇GH和MSTN基因的SNPs檢測和多態(tài)性分析,篩選與蘭州鲇生長性狀相關(guān)的分子標(biāo)記位點,為蘭州鲇的種質(zhì)資源保護以及良種選育提供理論依據(jù)。GH基因:本研究利用長片段PCR及T-A克隆技術(shù),首次從蘭州鲇(Silurus lanzhouensis)DNA中克隆得到蘭州鲇GH基因全序列,提交至Genbank獲得登錄號KM215221,同時,使用DNAstar等生物信息學(xué)軟件進行序列分析研究。蘭州鲇GH基因全序列長為2067 bp,包含5個外顯子和4個內(nèi)含子,其完整編碼區(qū)序列(Complete coding sequence,CDS)長為603 bp。編碼區(qū)編碼1條由200個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。第1、2、3、4、5外顯子大小分別為10、140、117、132和204 bp;第1、2、3、4內(nèi)含子大小分別為229,103,565和103bp;外顯子和內(nèi)含子之間遵循堿基GT-AG規(guī)則。通過對蘭州鲇GH基因的全序列進行了分段擴增、SSCP篩查以及測序,結(jié)果表明該基因第1、2、4、5外顯子和第3、4內(nèi)含子序列都相當(dāng)保守,僅在第3外顯子中發(fā)現(xiàn)1處SNPs。利用SAS軟件對蘭州鲇同一家系中不同基因型個體的生長性狀數(shù)值(體重、體長、體高和頭長)進行最小二乘法線性模型分析。研究發(fā)現(xiàn):在其第3外顯子中發(fā)現(xiàn)突變位點,100bp處G/A,該突變對蘭州鲇的體重和體長有顯著影響(P0.05)。共發(fā)現(xiàn)3種基因型,其中AA基因型個體的體重和體長極顯著高于BB基因型個體(P0.01),AB基因型個體體重顯著高于BB型個體;該突變對體高和頭長無顯著影響。MSTN基因:本研究利用蘭州鲇近緣物種MSTN基因序列設(shè)計引物,對蘭州鲇MSTN基因3個外顯子進行SNPs分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)第1外顯子位點存在360bp處A/G突變。通過分析MSTN基因不同基因型對體重、體長體高和頭長等生長性狀的影響,結(jié)果表明該突變對體重有顯著影響,對體長、體高和頭長無顯著影響。3種基因型中CC基因型個體和CD基因型個體的體重顯著高于DD基因型個體(P0.05)。本研究在對蘭州鲇GH和MSTN基因的SNPs篩查中共發(fā)現(xiàn)2個多態(tài)性標(biāo)記,通過分析其與蘭州鲇生長相關(guān)性狀的關(guān)系,結(jié)果顯示:GH和MSTN基因都可能是影響蘭州鲇的生長發(fā)育調(diào)控的主效基因。其中,篩選出GH基因第3外顯子G/A突變和MSTN基因第1外顯子A/G突變可作為蘭州鲇生長性狀選育的分子標(biāo)記,能夠為蘭州鲇種質(zhì)資源的保護和良種選育提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：蘭州鲇(Silurus lanzhouensis) 生長激素基因 肌肉抑制素基因 生長性狀 SNPs
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• Summary6-12
• 第一章 文獻綜述12-25
• 1 蘭州鲇簡介以及相關(guān)的研究12-13
• 1.1 鲇科魚類的起源12
• 1.2 蘭州鲇簡介12
• 1.3 蘭州鲇的相關(guān)研究12-13
• 2 魚類育種的研究現(xiàn)狀及發(fā)展13-16
• 2.1 常規(guī)育種技術(shù)13
• 2.2 性別控制技術(shù)13-14
• 2.3 多倍體育種技術(shù)14
• 2.4 分子育種技術(shù)14-15
• 2.5 轉(zhuǎn)基因技術(shù)15-16
• 3 生長性狀相關(guān)的兩個候選基因16-25
• 3.1 GH基因16-19
• 3.1.1 GH基因的結(jié)構(gòu)16
• 3.1.2 GH基因的釋放與轉(zhuǎn)運16-17
• 3.1.3 生長激素的生物學(xué)功能17-19
• 3.1.3.1 對三大類營養(yǎng)物質(zhì)的代謝的影響17-18
• 3.1.3.2 對泌乳的影響18
• 3.1.3.3 對生殖的影響18-19
• 3.2 MSTN基因19-25
• 3.2.1 MSTN基因的結(jié)構(gòu)20
• 3.2.2 MSTN基因的表達20-21
• 3.2.3 作用機理21-22
• 3.2.4 研究MSTN基因的意義22
• 3.2.5 MSTN研究進展22-25
• 第二章 試驗研究25-46
• 試驗一 蘭州鲇GH基因的克隆及序列分析25-37
• 1 試驗動物及數(shù)據(jù)采集25
• 1.1 實驗動物25
• 1.2 生長數(shù)據(jù)采集及方法25
• 2 主要儀器、試劑及配制方法25-27
• 2.1 主要儀器25-26
• 2.2 主要試劑26
• 2.3 試劑配制26-27
• 2.4 電泳的相關(guān)試劑27
• 2.5 轉(zhuǎn)化所用的相關(guān)試劑27
• 3 實驗方法及步驟27-30
• 3.1 DNA的提取27-28
• 3.2 DNA質(zhì)量和濃度的檢測28-29
• 3.3 PCR反應(yīng)體系29
• 3.3.1 PCR反應(yīng)體系29
• 3.3.2 PCR反應(yīng)程序29
• 3.3.3 PCR擴增產(chǎn)物檢測29
• 3.4 PCR產(chǎn)物的回收及克隆測序29-30
• 3.4.1 感受態(tài)細胞的制備(氯化鈣法)29-30
• 3.4.2 轉(zhuǎn)化反應(yīng)30
• 3.5 序列分析30
• 4 結(jié)果分析30-34
• 4.1 蘭州鲇GH基因的克隆、測序30-31
• 4.2 蘭州鲇GH基因結(jié)構(gòu)分析31-32
• 4.3 蘭州鲇GH基因和其他物種GH基因序列的比較分析32-34
• 5 討論34-37
• 5.1 GH基因的結(jié)構(gòu)特征34-35
• 5.2 蘭州鲇與其他物種GH基因編碼區(qū)核苷酸序列的比較35
• 5.3 GH基因系統(tǒng)發(fā)育分析35-37
• 試驗二 蘭州鲇GH基因和MSTN基因多態(tài)性和生長相關(guān)性研究37-46
• 1 實驗材料37
• 1.1 試驗樣品采集和相關(guān)數(shù)據(jù)的測定37
• 1.2 生長數(shù)據(jù)采集及方法37
• 2 實驗方法37-39
• 2.1 蘭州鲇基因組DNA的提取與檢測37
• 2.3 引物的設(shè)計37-38
• 2.3.1 蘭州鲇GH基因篩選引物的設(shè)計37-38
• 2.3.2 蘭州鲇MSTN基因篩選引物的設(shè)計38
• 2.4 GH基因和MSTN基因擴增結(jié)果38
• 2.5 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳38-39
• 2.5.1 12～15%聚丙烯酰胺凝膠制備及電泳38
• 2.5.2 非變性的丙烯酰胺凝膠的制備38-39
• 2.5.3 PCR產(chǎn)物變性及上樣39
• 2.5.4 銀染顯色39
• 3 統(tǒng)計方法39-40
• 3.1 等位基因頻率(Allele frequencies)39-40
• 4 結(jié)果分析40-43
• 4.1 蘭州鲇GH基因PCR擴增結(jié)果40-41
• 4.2 蘭州鲇GH基因的多態(tài)性及生長相關(guān)行分析41
• 4.3 SNPs檢測與蘭州鲇生長相關(guān)性狀關(guān)聯(lián)的分析41-42
• 4.3.1 GH基因的SNPs測序結(jié)果41-42
• 4.3.2 GH基因多態(tài)性與蘭州鲇生長性狀的相關(guān)性分析42
• 4.4 蘭州鲇MSTN基因的多態(tài)性檢測及其生長相關(guān)性分析42-43
• 4.4.1 SSCP檢測結(jié)果42
• 4.4.2 MSTN基因的SNPs測序結(jié)果42
• 4.4.3 MSTN等位基因及基因頻率42-43
• 4.4.4 MSTN基因多態(tài)性與蘭州鲇生長性狀的相關(guān)性分析43
• 5 討論43-46
• 5.1 GH基因多態(tài)性與生長性狀相關(guān)性分析43-45
• 5.2 MSTN基因多態(tài)性與生長性狀相關(guān)性分析45-46
• 第三章 結(jié)論46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻48-54
• 個人簡介54-55
• 導(dǎo)師簡介55-57

【參考文獻】

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本文編號：638144