發(fā)布時間：2017-07-31 02:04

  本文關(guān)鍵詞：小麥TaGAPC定點突變體基因載體構(gòu)建及其原核表達

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【摘要】：為了研究催化活性半胱氨酸Cys154、Cys158殘基對小麥細胞質(zhì)甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Ta GAPC)蛋白酶活性的影響,利用重疊延伸PCR法分別將這2個位點的半胱氨酸突變成絲氨酸,并分別連入p ET28a(+)原核表達載體。在25℃條件下,Ta GAPC及其定點基因Ta Cys154S/Ta Cys158S經(jīng)0.25 mmol/L IPTG誘導(dǎo)后高效表達,SDS-PAGE電泳檢測結(jié)果顯示,目標(biāo)重組蛋白均為可溶性且大小約為40 k Da,與預(yù)測結(jié)果一致。在此基礎(chǔ)上,經(jīng)超聲波破菌及鎳柱純化獲得3種純化重組蛋白。這為后續(xù)Ta GAPC及其定點突變體蛋白酶活性測定及活性位點分析提供試驗材料。
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;西北農(nóng)林科技大學(xué)黃土高原土壤侵蝕與旱地農(nóng)業(yè)國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： Ta GAPC 重疊延伸PCR 定點突變 原核表達 蛋白純化
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31271625) 黃土高原土壤侵蝕與旱地農(nóng)業(yè)國家重點實驗室專項(10502)
【分類號】：S512.1
【正文快照】： 甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phos-phate dehydrogenase,GAPDH)作為糖酵解反應(yīng)的一種關(guān)鍵酶,在煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(輔酶Ⅰ)和無機磷酸鹽存在的情況下,催化3-磷酸-甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油醛[1]。GAPDH普遍存在于原核和真核生物中,具有高度種屬保守序列[2-3]

【相似文獻】

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1 張曉梅;王宇梟;王祿山;陳冠軍;劉巍峰;高培基;;白腐真菌中錳過氧化物酶的體外轉(zhuǎn)錄表達系統(tǒng)的建立及相關(guān)定點突變體的研究[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

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本文編號：596968