發(fā)布時(shí)間：2017-07-28 09:21

  本文關(guān)鍵詞：荔枝落果過程中IAA和ABA相關(guān)基因表達(dá)及其定量檢測(cè)初探

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【摘要】：荔枝(Litchi chinensis Sonn.)屬于無(wú)患子科荔枝屬,生產(chǎn)上存在的主要問題是生理落果嚴(yán)重,極大限制了產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)以長(zhǎng)勢(shì)相似、掛果量相當(dāng)?shù)?株‘妃子笑’為試材,對(duì)盛花后約25 d的結(jié)果母枝分別進(jìn)行環(huán)剝?nèi)ト~(GPD)、環(huán)剝?nèi)ト~后浸泡2,4-D(GPDD)、乙烯利(ETH)處理,比較了不同處理間23個(gè)IAA和ABA相關(guān)基因熒光定量表達(dá)差異,篩選出12個(gè)與荔枝幼果脫落相關(guān)的基因,并對(duì)22個(gè)與荔枝落果相關(guān)基因(其中10個(gè)為本課題組前期篩選出的)進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化分析。此外,以荔枝幼果期果實(shí)為試材,探討了GC-MS方法測(cè)定荔枝果實(shí)中內(nèi)源IAA和ABA的含量。主要研究結(jié)果如下:(1)田間實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GPD和ETH處理顯著促進(jìn)‘妃子笑’荔枝盛花后25 d的幼果脫落,而GPDD處理則顯著抑制GPD所誘導(dǎo)的脫落。(2)通過比較不同處理間23個(gè)與IAA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和ABA生物合成相關(guān)基因的表達(dá)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)共有12個(gè)基因與荔枝果實(shí)脫落密切相關(guān),響應(yīng)荔枝果實(shí)脫落調(diào)控。這些基因包括LcTIR、LcARP1、LcARP2、LcAux/IAA1、LcAux/IAA3、LcAux/IAA5、LcGH3.2、LcPIN2、LcPIN4、LcSAUR、LcNCED和LcSDR。(3)通過對(duì)22個(gè)與荔枝幼果脫落關(guān)系密切的IAA、ABA相關(guān)基因進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,結(jié)果表明共有13個(gè)基因在其同源性較高的植物上有關(guān)于器官脫落的報(bào)道,這些基因包括:LcARF3、LcARP2、LcAux/IAA1、LcAux/IAA3、LcAux/IAA7、LcAux/IAA8、LcGH3.2、LcGH3.5、LcPIN5、LcSAUR2、LcSAUR3、LcSAUR4、LcNCED;其余9個(gè)基因雖響應(yīng)饑餓脅迫發(fā)生脫落,但在其基因相似性較高的植物上未見與脫落相關(guān)的報(bào)道,這些基因包括:LcTIR、LcARP1、LcAux/IAA5、LcAux/IAA6、LcAux/IAA9、LcPIN2、LcPIN4、LcSDR、LcMCSU。(4)本文對(duì)荔枝IAA、ABA定量檢測(cè)的GC-MS前處理方法進(jìn)行初探,雖沒有建立高效、穩(wěn)定、準(zhǔn)確的前處理方法,但發(fā)現(xiàn)在“濃縮”步驟容易出現(xiàn)大量損失,探索的過程對(duì)以后的研究提供了參考。
【關(guān)鍵詞】：荔枝 落果 生長(zhǎng)素 脫落酸 基因 GC-MS
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S667.1
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-6
• 縮略詞對(duì)照表6-12
• 1 前言12-22
• 1.1 植物內(nèi)源激素與器官脫落12-13
• 1.2 生長(zhǎng)素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因13-16
• 1.2.1 生長(zhǎng)素原初反應(yīng)基因13-15
• 1.2.2 生長(zhǎng)素響應(yīng)因子ARF（Auxin response factor）15
• 1.2.3 生長(zhǎng)素抑制蛋白ARP（Auxin-repressed protein）15-16
• 1.2.4 生長(zhǎng)素外排運(yùn)輸載體PIN（Auxin efflux carrier component）16
• 1.3 脫落酸生物合成基因16-17
• 1.4 植物內(nèi)源激素定量檢測(cè)的發(fā)展17-21
• 1.4.1 內(nèi)源激素的提取17-18
• 1.4.2 樣品的純化18
• 1.4.3 樣品的濃縮與復(fù)溶18
• 1.4.4 檢測(cè)方法18-19
• 1.4.5 果樹內(nèi)源激素定量檢測(cè)的研究19-21
• 1.5 研究目的與意義21-22
• 2 材料與方法22-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑和設(shè)備22-24
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑及來(lái)源22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及來(lái)源22-24
• 2.2 荔枝落果過程中IAA、ABA相關(guān)基因的熒光定量表達(dá)分析24-27
• 2.2.1 供試材料及處理24
• 2.2.2 熒光定量RNA的提取、檢測(cè)與模板的合成24-25
• 2.2.2.1 荔枝離區(qū)RNA的提取24-25
• 2.2.2.2 RNA濃度的測(cè)定25
• 2.2.2.3 RNA質(zhì)量的檢驗(yàn)25
• 2.2.2.4 RNA反轉(zhuǎn)錄合成c DNA第一條鏈25
• 2.2.3 內(nèi)參基因的選定25-26
• 2.2.4 IAA、ABA相關(guān)基因的篩選26
• 2.2.5 熒光定量的引物設(shè)計(jì)與檢測(cè)26
• 2.2.5.1 引物設(shè)計(jì)26
• 2.2.5.2 熔解曲線分析26
• 2.2.6 q RT-PCR分析26-27
• 2.3 IAA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和ABA生物合成蛋白家族系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建27
• 2.4 GC-MS定量檢測(cè)IAA和ABA含量初探27-33
• 2.4.1 供試材料及處理27
• 2.4.2 前處理方法初探27-31
• 2.4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的前處理28
• 2.4.2.2 樣品的前處理28-31
• 2.4.3 氣相色譜與質(zhì)譜條件31-32
• 2.4.4 內(nèi)源激素含量的計(jì)算方法32
• 2.4.5 加標(biāo)回收率的計(jì)算方法32-33
• 2.5 統(tǒng)計(jì)分析33
• 3 結(jié)果與分析33-60
• 3.1 不同處理對(duì)‘妃子笑’荔枝幼果脫落的影響33-34
• 3.2 篩選的IAA和ABA相關(guān)基因的熒光定量表達(dá)34-46
• 3.2.1 荔枝離區(qū)RNA的質(zhì)量檢驗(yàn)34-35
• 3.2.2 熒光定量引物的設(shè)計(jì)和優(yōu)化35-40
• 3.2.3 篩選基因的熒光定量表達(dá)分析40-46
• 3.2.3.1 IAA相關(guān)基因的表達(dá)40-44
• 3.2.3.2 ABA相關(guān)基因的表達(dá)44-46
• 3.3 IAA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和ABA生物合成蛋白家族系統(tǒng)進(jìn)化分析46-55
• 3.3.1 IAA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白CDS序列聚類分析46-52
• 3.3.2 ABA生物合成蛋白CDS序列聚類分析52-55
• 3.4 GC-MS檢測(cè)方法初探55-60
• 3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品全譜圖55-56
• 3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線56-57
• 3.4.3 三種前處理方法檢測(cè)結(jié)果比較57-58
• 3.4.4 前處理過程中不同步驟添加標(biāo)樣對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響58-60
• 4 討論60-67
• 4.1 饑餓脅迫和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑與果實(shí)脫落60-61
• 4.2 荔枝落果過程中IAA和ABA相關(guān)基因的表達(dá)61-65
• 4.2.1 生長(zhǎng)素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與果實(shí)脫落61-64
• 4.2.2 脫落酸生物合成與果實(shí)脫落64-65
• 4.3 植物內(nèi)源激素的GC-MS定量檢測(cè)初探65-67
• 5 結(jié)論67-68
• 致謝68-69
• 參考文獻(xiàn)69-81

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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7 劉長(zhǎng)江;劉e鴈，

本文編號(hào)：583355