融合PCR結(jié)合同源重組技術(shù)敲除白色假絲酵母菌FLO8基因
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【摘要】:目的運用融合PCR和同源重組技術(shù)敲除白色假絲酵母菌FLO8基因,并初步分析敲除菌株藥物敏感性(藥敏)情況。方法運用融合PCR將FLO8基因的上下游片段與篩選標記融合在一起構(gòu)成同源敲除組件,再用高效醋酸鋰轉(zhuǎn)染法將敲除組件轉(zhuǎn)染入白色假絲酵母菌SN152,在營養(yǎng)缺陷板上進行篩選,通過2次同源重組敲除FLO8的2條等位基因。采用點板法比較FLO8未敲除株與敲除株藥敏情況。結(jié)果成功構(gòu)建白色假絲酵母菌SN152 FLO8雙等位基因缺失株,且耐藥性FLO8~(-/-)FLO8~(+/-)SN152。結(jié)論融合PCR結(jié)合同源重組技術(shù)能高效、快速構(gòu)建白色假絲酵母菌FLO8基因缺失株,白色假絲酵母菌FLO8基因與藥敏相關(guān),且FLO8拷貝數(shù)越少耐藥性越強。
【作者單位】: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院檢驗科;上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院放免檢驗科;
【關(guān)鍵詞】: 白色假絲酵母菌 FLO基因 基因敲除 耐藥性
【基金】:上海市科委基金(15ZR1426900) 上海市醫(yī)學(xué)重點?平ㄔO(shè)項目(ZK2012A21) 上海市黃浦區(qū)優(yōu)秀青年人才(RCPY1407)~~
【分類號】:R440
【正文快照】: 上海200020二相性真菌白色假絲酵母菌是最常見的機會性致病菌,能夠引起人類多部位,甚至系統(tǒng)性假絲酵母菌病[1-2]。據(jù)調(diào)查,曾患有假絲酵母菌性外陰陰道炎并被確診至少1次的女性比例近75%[3]。近年來,由于免疫功能缺陷患者不斷增多,由白色假絲酵母菌引起的假絲酵母菌病也成為日
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,本文編號:576260
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