本文關鍵詞：中華蜜蜂SRP9基因的克隆、序列分析及原核表達

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【摘要】：【目的】探究中華蜜蜂Apis cerana cerana信號識別顆粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,獲得純化的重組蛋白,為探究其蛋白功能奠定基礎�！痉椒ā坷肦T-PCR方法,以中華蜜蜂的c DNA為模板擴增中華蜜蜂SRP9基因編碼區(qū),并通過軟件MEGA5.1構建系統(tǒng)發(fā)育樹,運用Predice Protein和SWISS-MODEL等軟件預測分析蛋白結構;用大腸桿菌Escherichia coli表達系統(tǒng)進行原核表達;采用尿素洗脫法進行重組蛋白純化�！窘Y果】擴增得到的中華蜜蜂SRP9基因編碼區(qū)長為237 bp,命名為Acc SRP9。該基因編碼78個氨基酸,編碼蛋白的相對分子量為9.36 k D,等電點為9.17。系統(tǒng)進化樹分析表明,Acc SRP9與西方蜜蜂Apis mellifera的SRP9和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支。蛋白質二級結構預測發(fā)現(xiàn)其含有2個α-螺旋區(qū)和3個β-折疊區(qū)。利用同源建模獲得蛋白質的三維結構。將Acc SRP9連入表達載體p GEX-6P-1并在BL21(DE3)中進行原核表達,發(fā)現(xiàn)該重組蛋白表達在包涵體中,經(jīng)蛋白純化,最終獲得了N端帶GST標簽的重組蛋白p GEX-6P-1-SRP9�！窘Y論】本研究成功克隆了中華蜜蜂SRP9基因Acc SRP9,對其序列進行了分析,并獲得了帶有標簽的重組蛋白,為進一步研究該基因的功能提供參考和材料。
【作者單位】： 中國農業(yè)科學院蜜蜂研究所農業(yè)部授粉昆蟲生物學重點實驗室;中國農業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所;
【關鍵詞】： 中華蜜蜂 SRP 基因克隆 序列分析 結構預測 原核表達
【分類號】：Q966
【正文快照】： 人類首次分離得到了信號識別顆粒(signalrecognition particle,SRP)是在20世紀80年代(Walter and Blobel,1980),研究表明,SRP是普遍存在于各生物細胞質中的一種核糖核酸-蛋白復合物,在蛋白轉運系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用(Walter andBlobel,1980;Tozik et al.,2002;李菁菁,2012)。SRP

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本文編號：568348