本文關(guān)鍵詞：嗜熱菌β-葡萄糖苷酶A基因的克隆表達(dá)及轉(zhuǎn)化大豆異黃酮糖苷

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【摘要】：對嗜熱厭氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200基因組DNA中β-葡萄糖苷酶A基因(Te-BglA)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-20b-Te-BglA,并對純化的重組酶Te-BglA的酶學(xué)性質(zhì)和動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行研究。結(jié)果表明,基因Te-BglA在Escherichia coli細(xì)胞中成功表達(dá),獲得重組酶Te-BglA,該酶的最適溫度和p H值分別為80℃和7.0。以對硝基苯酚-β-葡萄糖苷(pNPG)為底物時,K_m值為(0.78±0.02)mmol/L,K_(cat)/K_m值為(6.86±0.16)×10~4 L/(mol·s);以天然底物水楊苷為底物時,K_m值為(5.18±0.10)mmol/L,K_(cat)/K_m值為(2.04±0.02)×10~4 L/(mol·s),兩者比較可知,重組酶Te-BglA表現(xiàn)出對pNPG更好的親和力和更高的催化效率常數(shù)。該酶在80℃保溫1 h后相對于冰浴中(未保溫)的酶活仍有70.1%的殘留,在pH 4.5~8.0區(qū)間仍保持較高的pH穩(wěn)定性。酶解大豆粉的結(jié)果表明,重組酶Te-BglA在80℃作用3 h后,大豆黃素和染料木素的產(chǎn)量分別達(dá)到35.9 mg/g和59.1 mg/g。
【作者單位】： 信陽農(nóng)林學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院;南京師范大學(xué)金陵女子學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： β-葡萄糖苷酶 酶學(xué)性質(zhì) 大豆異黃酮糖苷 苷元
【基金】：河南省科技攻關(guān)資助項目(132102110047)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 大豆異黃酮因具有抗腫瘤作用、緩解更年期綜合征、理想的轉(zhuǎn)化途徑[7-9]。雖有很多來源于細(xì)菌或真菌轉(zhuǎn)化大豆抗輻射、延緩衰老等功效而成為國內(nèi)外研究熱點(diǎn)[1-3]。目前異黃酮糖苷β-葡萄糖苷酶的報道,但有關(guān)耐熱性高效水解研究發(fā)現(xiàn)的12種大豆異黃酮根據(jù)結(jié)構(gòu)的不同分為兩大糖苷的

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本文編號：551970