本文關鍵詞：鮮切生菜中沙門氏菌的生長預測及滲透抗逆境應答基因rpoS對沙門氏菌的影響

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【摘要】：沙門氏菌是一種分布廣泛的食源性致病菌,嚴重影響著人們的健康和國民經(jīng)濟的發(fā)展。為了控制其危害,本文選用已經(jīng)全基因測序的模式菌株Salmonella enterica serovar Typhimurium SL1344,及本研究構建的rpoS基因缺失的SL1 344菌株SL1344/△rpoS,和分離自食品中的野生菌株LQG-1進行微生物應急生長調控的研究。首先對SL1344進行馴化,使其能夠在只有葡萄糖能夠提供碳源的BMM培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長；并將已馴化的SL1344菌株進行周期性高滲刺激,探究沙門氏菌延滯期的變化情況；接著以SL1344為原始菌株,采用λred同源重組技術構建逆境應答相關基因rpoS基因缺失的沙門氏菌菌株SL1344/△rpoS。同時,以并從生鮮豬肉中分離得到沙門氏菌野生菌株LQG-1為研究對象,對其進行鑒定,并將SL1344、SL1344/△rpoS及LQG-1的生長在逆境中進行比較,探究rpoS在滲透應答中在轉錄層面的調控方式和變化,說明在鮮肉與鮮切生菜交叉感染沙門氏菌后,rpoS對生長動力學參數(shù)的影響作用。為說明環(huán)境周期性變化對微生物適應力的影響,對SL1344進行研究。結果表明(1)經(jīng)馴化的SL1344連續(xù)3～4次傳代,當初始菌量相同時,其達到穩(wěn)定期時菌量的數(shù)量級也相同,說明SL1344能夠在只有葡萄糖提供碳源的BMM培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長；(2)已馴化好的菌株SL1344在NaCl濃度為3%、3.5%、4%和5%的BMM中培養(yǎng),根據(jù)其延滯期初始下降幅度及生長周期長短的比較結果,確定適宜的NaCl的添加濃度為3.5%；(3)已馴化且未經(jīng)滲透處理的SL1344在含3.5%NaCl、0%NaCl的BMM中周期性交替的培養(yǎng),并觀察其在BMM-NaCl中的生長情況,結果發(fā)現(xiàn)SL1344首次在BMM-NaCl中培養(yǎng),即為第0次轉移,其延滯期初始下降幅度最大,生長至穩(wěn)定期所需時間最長。隨著轉移次數(shù)的增多,延滯期的初始下降幅度越來越小,到第4次轉移時幾乎為零。為研究逆境應答基因rpoS對實際食品中沙門氏菌生長的影響情況,通過λ red同源重組技術,構建SL1344/△rpoS;從實際食品生鮮豬肉中分離得到LQG-1,并對其進行鑒定。結果顯示：(1)構建SL1344/ArpoS菌株過程中,用同一對引物鑒定,rpoS基因PCR擴增產物片段、替換后擴增片段及消除后擴增片段分別為1344bp、1432bp、500bp左右,證明rpoS基因缺失菌株SL1344/ArpoS構建成功； (2)對LQG-1進行鑒定,其菌體短桿狀、無芽孢、革蘭氏染色呈陰性,經(jīng)16SrDNA序列進行分析,確定其為沙門氏菌。為探索rpoS基因與實際食品中沙門氏菌生長的影響,將SL1344、 SL1344/△rpoS和LQG-1分別接種于LB肉湯、含NaCl 3.5%的BMM以及鮮切生菜上,以Baranyi建立得到其一級模型,擬合得到其生長動力學相關參數(shù),比較延滯期和最大比生長速率,可以得知：(1)LB液體培養(yǎng)基中,三菌株生長基本同步；(2)在含3.5%NaCl的BMM中,SL1344比SL1344/△rpoS更容易適應新環(huán)境； (3)在生菜上,LQG-1來源于食品,更易在實際食品中建立新的循環(huán),適應新環(huán)境。SL1344菌株有小幅度的生長,SL1344/△rpoS幾乎不生長,在一段時間后逐漸衰亡。
【關鍵詞】：沙門氏菌 生長預測模型 高滲逆境 rpoS基因
【學位授予單位】：四川農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TS255.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1. 文獻綜述10-18
• 1.1 立題背景10-16
• 1.1.1 預測微生物學11-13
• 1.1.2 水分活度13-14
• 1.1.3 sigma因子14-16
• 1.2 研究目標16
• 1.3 研究內容16-17
• 1.4 技術路線17-18
• 2. 材料與方法18-27
• 2.1 材料18-20
• 2.1.1 樣品、菌株及質粒18
• 2.1.2 培養(yǎng)基18-19
• 2.1.3 試劑19
• 2.1.4 引物19-20
• 2.2 儀器設備20
• 2.3 方法20-27
• 2.3.1 周期性高滲透壓刺激下沙門氏菌SL1344的生長測定20-22
• 2.3.2 沙門氏菌rpoS缺失菌株SL1344/ΔrpoS的構建22-25
• 2.3.3 野生沙門氏菌菌株LQG-1的篩選及鑒定25-26
• 2.3.4 不同環(huán)境下沙門氏菌SL1344、SL1344/ArpoS、LQG-1的生長測定26-27
• 3 結果與分析27-38
• 3.1 周期性高滲透壓刺激下沙門氏菌SL1344的生長測定27-31
• 3.1.1 SL1344的馴化結果27-28
• 3.1.2 滲透壓條件的確定28-29
• 3.1.3 生長數(shù)據(jù)的采集29-31
• 3.2 沙門氏菌rpoS缺失菌株SL1 344/ΔrpoS的構建31-34
• 3.2.1 目的基因rpoS的鑒定31-32
• 3.2.2 含rpoS同源臂的CmLr基因片段的擴增32-33
• 3.2.3 SL1 344/ArpoS：：CmLr菌株的鑒定33
• 3.2.4 沙門氏菌rpoS基因缺陷菌株的PCR鑒定33-34
• 3.3 沙門氏菌野生菌株LQG-1篩選鑒定結果34-36
• 3.3.1 革蘭氏染色結果34-35
• 3.3.2 16SrDNA鑒定35
• 3.3.3 系統(tǒng)進化樹35-36
• 3.4 不同環(huán)境下沙門氏菌SL1344、SL1344/ArpoS、LQG-1的生長比較36-38
• 3.4.1 營養(yǎng)富集條件下三菌株的生長比較結果36-37
• 3.4.2 高滲應激條件下SL1344與SL1 344/ΔrpoS的生長比較結果37-38
• 3.4.3 實際食品(鮮切生菜)中三菌株的生長比較結果38
• 4 討論38-41
• 5 全文結論41-42
• 6 創(chuàng)新點與展望42-44
• 6.1 創(chuàng)新點42
• 6.2 展望42-44
• 參考文獻44-49
• 附錄49-51
• 致謝51-52
• 攻讀學位期間發(fā)表的文章目錄52

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉密;鮮切生菜中沙門氏菌的生長預測及滲透抗逆境應答基因rpoS對沙門氏菌的影響[D];四川農業(yè)大學;2016年

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本文編號：550323