發(fā)布時(shí)間：2017-07-15 21:10

  本文關(guān)鍵詞：MiR-21靶向沉默HEPN1基因促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌增殖的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： HEPN1基因 MiR-21 3

【摘要】：目的:探討HEPN1(hepatocellular carcinoma,down-regulated 1)基因與miR-21的相互作用及其在肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。方法:(1)運(yùn)用生物信息學(xué)工具預(yù)測,發(fā)現(xiàn)HEPN1基因與miR-21間潛在的靶向關(guān)系;(2)運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)和Western blot技術(shù)檢測72對HCC組織及其癌旁組織中HEPN1和miR-21的表達(dá)量,并分析二者表達(dá)量的相關(guān)性;(3)構(gòu)建含有miR-21靶位點(diǎn)序列和不含靶位點(diǎn)序列的重組質(zhì)粒(pGL3-HEPN1-WT,p GL3-HEPN1-MT),分別與0-100 nM不同濃度的miR-21 mimic共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系(HepG2,Hep3B),通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測,驗(yàn)證HEPN1與miR-21的靶向關(guān)系;(4)分別用不同濃度的miR-21 inhibitor(0-200 nM)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系(HepG2,Hep3B),檢測miR-21和HEPN1表達(dá)量及細(xì)胞增殖水平的變化。miR-21 inhibitor與siRNA-HEPN1共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系,進(jìn)一步驗(yàn)證HCC細(xì)胞增殖變化是否由HEPN1介導(dǎo)。結(jié)果:(1)生物信息學(xué)工具初步發(fā)現(xiàn)HEPN1基因與miR-21間存在潛在的靶向關(guān)系;(2)qPCR檢測結(jié)果顯示,HCC癌旁組織中HEPN1的表達(dá)量比肝癌組織高33.5倍(P0.001),肝癌旁組織中miR-21的表達(dá)量比肝癌組織低3.21倍(P0.001),二者的表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)(R2=0.442,P0.0001)。HEPN1蛋白表達(dá)水平與qPCR檢測mRNA結(jié)果一致;(3)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測結(jié)果顯示,在轉(zhuǎn)染不同濃度的miR-21 mimic時(shí),pGL3-HEPN1-WT重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的熒光素酶活性均顯著低于pGL3-HEPN1-MT重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組。隨著mi R-21 mimic濃度的增加,兩種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的熒光酶活性雖然均出現(xiàn)了顯著下降,并呈現(xiàn)出miR-21 mimic濃度依賴性,但通過斜率分析發(fā)現(xiàn)二者之間的熒光下降程度仍存在顯著性差異(Slope difference0.001);(4)不同濃度miR-21 inhibitor轉(zhuǎn)染兩種肝癌細(xì)胞系后,miR-21表達(dá)量均顯著降低(P0.05),而HEPN1在mRNA和蛋白水平均顯著性升高(P0.05)。MTT檢測結(jié)果顯示,隨著miR-21 inhibitor濃度不斷增加,肝癌細(xì)胞增殖出現(xiàn)明顯抑制,而這種抑制效應(yīng)可被siRNA-HEPN1部分反轉(zhuǎn)。結(jié)論:(1)HEPN1可能是mi R-21潛在的靶基因之一;(2)MiR-21可能通過沉默HEPN1,促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖,進(jìn)而參與HCC的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：HEPN1基因 MiR-21 3'非翻譯區(qū) 肝細(xì)胞肝癌
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料與方法11-25
• 結(jié)果25-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32-33
• 論文創(chuàng)新點(diǎn)33-34
• 問題與展望34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述38-56
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 附錄56-63
• 中英文對照縮略詞表63-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文64-65
• 致謝65-66

，

本文編號：545758