本文關(guān)鍵詞：榛子產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌Penicillium aurantiogriseum中GGPP合酶基因的克隆與表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：r{牛兒基r{牛兒基焦磷酸合酶是產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌紫杉醇合成下游途徑中的關(guān)鍵步驟之一,在榛子產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌中進(jìn)行紫杉醇生物合成研究時(shí)首先要確認(rèn)GGPP合酶的存在。該研究通過(guò)RT-PCR方法克隆得到了榛子產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌Penicillium aurantiogriseum中GGPP合酶基因Pa GGPPS(Gen Bank登錄號(hào)為KM881430)的c DNA開(kāi)放閱讀框(Open reading frame,ORF)。利用生物信息學(xué)方法,我們分析了該基因的序列,并對(duì)其編碼的氨基酸序列進(jìn)行了預(yù)測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該基因ORF長(zhǎng)度為1 113 bp,預(yù)計(jì)蛋白分子量為40.98k D,等電點(diǎn)為6.168,表明該蛋白呈酸性。對(duì)其進(jìn)行親疏水性分析發(fā)現(xiàn)肽鏈整體呈現(xiàn)為親水性。Pa GGPPS的主要二級(jí)結(jié)構(gòu)元件為α-螺旋,并且包含一個(gè)異戊二烯類化合物合酶功能域。對(duì)榛子產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌與其他物種的GGPPS進(jìn)行氨基酸同源性分析,發(fā)現(xiàn)其與婁地青霉、曲霉菌和費(fèi)氏新薩托菌的一致性較高,分別為94%、76%和76%。進(jìn)化樹分析表明來(lái)自動(dòng)物、真菌和酵母的GGPPS聚為一類,來(lái)自植物的GGPPS聚為一類,其中榛子產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌的GGPPS和青霉菌的進(jìn)化關(guān)系最近,與植物的GGPPS的進(jìn)化關(guān)系最遠(yuǎn)。對(duì)其進(jìn)行基礎(chǔ)生物信息學(xué)分析后,我們構(gòu)建了原核表達(dá)載體,成功誘導(dǎo)其表達(dá)并得到可溶性蛋白。該研究結(jié)果為下一步深入研究GGPPS基因在內(nèi)生真菌Penicillium aurantiogriseum紫杉醇合成途徑中的作用及和構(gòu)建高產(chǎn)紫杉醇基因工程菌株奠定了一定的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 內(nèi)生真菌 GGPP合酶 原核表達(dá) 基因克隆 紫杉醇
【基金】：中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(RIF2014-01,CAFYBB2012-042)~~
【分類號(hào)】：Q78;Q936
【正文快照】： LIU Hong-Wei,YANG Yan-Fang,LI Yan-Yan,WANG Shuai,QIU De-You*(State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding,Research Institute of Forestry,Chinese Academy of Forestry,Beijing 100091,China)紫杉醇是Wall(1971)從短葉紅豆杉(Taxus bre-vifolia)中分離到的二

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 化文平;宋雙紅;智媛;王U喼

本文編號(hào)：506460