發(fā)布時(shí)間：2017-06-30 10:04

  本文關(guān)鍵詞：miR-182通過靶基因Clock介導(dǎo)大鼠缺氧缺血性腦損傷后節(jié)律紊亂的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)后松果體內(nèi)miR-182及鐘基因Clock的表達(dá)變化,并觀察miR-182過表達(dá)/表達(dá)沉默時(shí)對(duì)體外培養(yǎng)松果體細(xì)胞鐘基因Clock的影響,分析miR-182與Clock表達(dá)之間的調(diào)控關(guān)系,研究miR-182在HIBD導(dǎo)致的晝夜節(jié)律紊亂中的作用。方法:應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-PCR)測(cè)定miR-182在正常大鼠各組織(肺、腸、胃、腎、大腦皮層、松果體組織)中的表達(dá)差異。將7日齡的新生Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為HIBD模型組和假手術(shù)組,根據(jù)Rice-Vannucci法制作HIBD模型,分別利用RT-PCR技術(shù)和Western blot法測(cè)定兩組在缺氧缺血后0 h、24 h、48 h、72 h松果體中miR-182、靶基因Clock mRNA及Clock蛋白的表達(dá)水平。無菌手術(shù)下分離得到新生大鼠松果體,采用胰酶消化、差速貼壁分離等方法獲得松果體細(xì)胞,體外培養(yǎng)并傳代,利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,CCK-8測(cè)定細(xì)胞增殖情況,5-HT及MAP-2免疫熒光法鑒定松果體細(xì)胞。使用miR-182過表達(dá)/表達(dá)沉默慢病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的松果體細(xì)胞,轉(zhuǎn)染成功后分別利用RT-PCR技術(shù)和Western blot法測(cè)定松果體細(xì)胞中Clock mRNA以及Clock蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1、RT-PCR結(jié)果顯示mi R-182在松果體組織中高豐度表達(dá)。2、HIBD組在HIBD模型制備后24 h、48 h,mi R-182的表達(dá)水平高于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組(P0.05),0 h、72 h與假手術(shù)組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),HIBD模型制備后24 h miR-182水平開始升高,持續(xù)至48 h。與對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組相比,HIBD組在HIBD模型制備后0 h Clock mRNA表達(dá)水平升高,48 h時(shí)降低,72 h后明顯升高(P0.05),24 h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、與對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組相比,HIBD組在HIBD模型制備后0 h Clock蛋白的表達(dá)水平降低,72 h Clock蛋白的表達(dá)水平升高(P0.05),而24 h、48 h Clock蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、采用胰酶消化、差速貼壁分離等方法并結(jié)合DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng),體外可獲得純度較高且有增殖潛力的大鼠松果體細(xì)胞。5、與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組松果體細(xì)胞中過表達(dá)或表達(dá)沉默miR-182,Clock mRNA的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組松果體細(xì)胞中過表達(dá)miR-182,Clock蛋白的表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組松果體細(xì)胞中miR-182表達(dá)沉默,Clock蛋白的表達(dá)水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:松果體中miR-182可能在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控Clock基因的表達(dá),mi R-182可能通過調(diào)控靶基因Clock參與了松果體HIBD后晝夜節(jié)律紊亂的病理生理過程。
【關(guān)鍵詞】：miR-182 Clock基因 缺氧缺血性腦損傷 新生大鼠 松果體
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分 缺氧缺血性腦損傷新生大鼠松果體MIR-182及CLOCK的表達(dá)變化12-27
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-25
• 討論25-27
• 第二部分 松果體細(xì)胞體外培養(yǎng)及MIR-182在松果體細(xì)胞中對(duì)CLOCK表達(dá)調(diào)控的研究27-44
• 材料與方法27-35
• 結(jié)果35-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 綜述 MIRNA與神經(jīng)系統(tǒng)的研究49-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 英漢縮略語名詞對(duì)照57-58
• 研究生期間發(fā)表及待發(fā)表文章58
• 研究生期間獲獎(jiǎng)情況58-59
• 致謝59-60

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