本文關(guān)鍵詞：綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的體外分離、培養(yǎng)和鑒定增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)轉(zhuǎn)基因大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)。方法取EGFP轉(zhuǎn)基因大鼠脛、股骨骨髓,全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)、純化BMSCs;熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表型;CCK-8法繪制細(xì)胞生長曲線并與野生型BMSCs增殖情況相比較;分別向成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化鑒定;將細(xì)胞經(jīng)鼠尾靜脈移植入大鼠體內(nèi),觀察其在體內(nèi)定植情況。結(jié)果獲得穩(wěn)定表達(dá)EGFP的BMSCs,以長梭形為主,融合后呈漩渦狀排列;生長曲線示EGFP-BMSCs增殖能力旺盛,與野生型BMSCs相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-0.023,P=0.982);細(xì)胞CD29、CD90、CD34、CD49d、CD45表達(dá)率分別為99.4%、96.4%、0.171%、0.049%、0.038%;成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)后,分別給予油紅O、茜素紅、甲苯胺藍(lán)染色,結(jié)果均呈陽性;在肺組織內(nèi)可檢測(cè)到穩(wěn)定的綠色熒光。結(jié)論成功獲得高純度、穩(wěn)定表達(dá)EGFP的BMSCs,干細(xì)胞特性不受EGFP影響。細(xì)胞定植后,示蹤效果良好,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
【作者單位】： 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院兒科;東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院心胸外科;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 綠色熒光蛋白 誘導(dǎo)分化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81370739) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK20131303)~~
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： Acta Acad Med Sin,2016,38(1):9-15間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是來源于中胚層的一類多能干細(xì)胞,主要存在于結(jié)締組織和器官間質(zhì)中[1-3]。MSCs有維持組織和器官動(dòng)態(tài)平衡、修復(fù)再生等重要作用[3-9],而來源于骨髓的MSCs(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC

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本文編號(hào)：499006