發(fā)布時(shí)間：2017-06-29 07:04

  本文關(guān)鍵詞：食管癌Eca109細(xì)胞的HPV16-E6基因轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的確定HPV16-E6基因轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染條件。方法取體外培養(yǎng)的食管癌Eca109細(xì)胞,用中心復(fù)合試驗(yàn)設(shè)計(jì)分組,轉(zhuǎn)染條件控制因素包括DNA用量、Lip2000/DNA和饑餓時(shí)間,DNA用量分0.65、1.00、1.50、2.00、2.35μg共5檔,Lip2000/DNA分0.65、1.00、1.50、2.00、2.35μL/μg共5檔,饑餓時(shí)間分0、3、7.5、12、15 h共5檔,共設(shè)20個(gè)組。轉(zhuǎn)染24 h后,倒置顯微鏡下觀察各組熒光情況并拍照,用圖像處理軟件計(jì)算細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率;用CCK-8法測(cè)算各組細(xì)胞相對(duì)存活率。用響應(yīng)曲面法繪制有交互影響的因素對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和相對(duì)存活率影響的響應(yīng)曲面,以目的基因細(xì)胞數(shù)(轉(zhuǎn)染效率×細(xì)胞存活率)最大化為原則,確定最佳轉(zhuǎn)染條件。在最佳轉(zhuǎn)染條件下用HPV16-E6基因轉(zhuǎn)染食管癌Eca109細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和相對(duì)存活率。結(jié)果隨著饑餓時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞相對(duì)存活率呈下降趨勢(shì)。依據(jù)饑餓0 h的轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞存活率響應(yīng)曲面圖,得出最佳轉(zhuǎn)染條件為(24孔培養(yǎng)板):DNA用量1.35μg、Lip2000/DNA1.12μL/μg(換算成Lip2000用量為1.51μL)、細(xì)胞饑餓時(shí)間0 h;轉(zhuǎn)染效率預(yù)測(cè)值可達(dá)38.68%,細(xì)胞相對(duì)存活率預(yù)測(cè)值為85.09%。在最佳轉(zhuǎn)染條件下用相同方法轉(zhuǎn)染,實(shí)際轉(zhuǎn)染效率為39.79%,與預(yù)測(cè)值的相對(duì)誤差為2.87%。結(jié)論 HPV16-E6基因轉(zhuǎn)染Eca109細(xì)胞的最佳轉(zhuǎn)染條件(24孔板)為:每孔DNA用量1.35μg,脂質(zhì)體Lip2000用量1.51μL,不對(duì)細(xì)胞進(jìn)行饑餓處理。
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 食管癌 人乳頭瘤病毒 基因轉(zhuǎn)染效率 細(xì)胞相對(duì)存活率 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260362)
【分類號(hào)】：R735.1
【正文快照】： 人乳頭狀瘤病毒(HPV)是一種具有高度特異性的嗜上皮性病毒,與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān),HPV16黏膜高危亞型與食管癌發(fā)病的關(guān)系尤其密切[1,2],但其相關(guān)程度以及HPV對(duì)食管癌細(xì)胞的作用機(jī)制并沒有明確的定論[3,4]。研究HPV16對(duì)食管癌細(xì)胞的影響首先要通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將HPV16核酸片段

【相似文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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