發(fā)布時(shí)間：2025-05-27 03:41

　　肺炎克雷伯氏菌是重要的條件致病菌,可導(dǎo)致林麝肺炎,從而引起死亡。肺炎克雷伯氏菌中的LysR型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子可參與調(diào)控其毒力、分解代謝、耐藥性等。本研究通過(guò)構(gòu)建林麝源肺炎克雷伯氏菌GPKP中新發(fā)現(xiàn)的LysR型轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的缺失株及回補(bǔ)株,比較三者的生長(zhǎng)曲線、藥敏試驗(yàn)、生物被膜、抗逆性、細(xì)菌半數(shù)致死量、定殖能力及其引起的器官病理形態(tài)學(xué)等生物學(xué)特性的差異,探究該轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的基本功能,主要試驗(yàn)結(jié)果如下:1.林麝源肺炎克雷伯氏菌基因kp05372缺失株及回補(bǔ)株的構(gòu)建:擴(kuò)增基因kp05372上下游同源臂,交疊PCR獲得融合片段,以pLP12T質(zhì)粒為載體,通過(guò)無(wú)縫克隆連接,成功構(gòu)建重組自殺質(zhì)粒。通過(guò)接合轉(zhuǎn)移,在氯霉素壓力正向篩選及阿拉伯糖誘導(dǎo)反向篩選下,經(jīng)兩次同源重組,最終成功篩選到缺失株GPKP-△kp05372。以質(zhì)粒pBAD33為載體克隆連接敲除基因片段kp05372,成功構(gòu)建回補(bǔ)表達(dá)質(zhì)粒pBAD33-KP。通過(guò)接合轉(zhuǎn)移,阿拉伯糖誘導(dǎo)調(diào)節(jié)基因表達(dá)量,成功篩選到回補(bǔ)株GPKP-△kp05372⁺。2.林麝源肺炎克雷伯氏菌生物學(xué)特性分析:三株菌生長(zhǎng)速率無(wú)顯著差異,均表現(xiàn)為2 h...

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述及研究目的和意義
    1 林麝的研究概況
        1.1 林麝的現(xiàn)狀
        1.2 林麝常見(jiàn)疾病的研究現(xiàn)狀
    2 肺炎克雷伯氏菌的生物學(xué)特征研究概況
        2.1 病原學(xué)
        2.2 流行病學(xué)
        2.3 耐藥機(jī)制
        2.4 致病性
    3 LysR型轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        3.1 LysR型轉(zhuǎn)錄因子的基本結(jié)構(gòu)特征
        3.2 LysR蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控模式
        3.3 LysR家族轉(zhuǎn)錄因子的主要功能
        3.4 肺炎克雷伯氏菌中的LysR家族轉(zhuǎn)錄因子
    4 肺炎克雷伯氏菌基因缺失技術(shù)概況
        4.1 λ Red重組技術(shù)
        4.2 自殺載體同源重組技術(shù)
        4.3 插入突變基因技術(shù)
    5 研究的目的與意義
第二部分 研究?jī)?nèi)容
    第一章 林麝源肺炎克雷伯氏菌GPKP基因KP05372 缺失株GPKP-△KP05372 及回補(bǔ)株GPKP-△KP05372+的構(gòu)建
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 主要菌株及質(zhì)粒
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 缺失株及回補(bǔ)株引物設(shè)計(jì)
            2.2 pLP12-KP自殺質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.3 林麝GPKP-△kp05372 缺失株的構(gòu)建
            2.4 pBAD33-KP回補(bǔ)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
            2.5 林麝GPKP-△kp05372+回補(bǔ)株的構(gòu)建
        3 試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 pLP12-KP自殺質(zhì)粒的構(gòu)建
            3.2 林麝GPKP-△kp05372 缺失株的構(gòu)建
            3.3 pBAD33-KP回補(bǔ)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
            3.4 林麝GPKP-△kp05372⁺回補(bǔ)株的構(gòu)建
        4 討論
    第二章 林麝源肺炎克雷伯氏菌基因缺失株、回補(bǔ)株及野生株生物學(xué)特性對(duì)比研究.
        1 試驗(yàn)材料
            1.1 主要菌株及試驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗(yàn)方法
            2.1 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
            2.2 藥敏試驗(yàn)
            2.3 生物被膜檢測(cè)
            2.4 抗逆性的檢測(cè)
            2.5 細(xì)菌半數(shù)致死量LD₅₀ 檢測(cè)
            2.6 細(xì)菌定殖能力檢測(cè)
            2.7 組織病理學(xué)觀察試驗(yàn)
        3 試驗(yàn)結(jié)果
            3.1 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
            3.2 藥敏試驗(yàn)
            3.3 生物被膜檢測(cè)
            3.4 抗逆性的檢測(cè)
            3.5 細(xì)菌半數(shù)致死量LD₅₀ 檢測(cè)
            3.6 細(xì)菌定殖能力檢測(cè)
            3.7 組織病理學(xué)觀察
        4 討論
            4.1 生長(zhǎng)速率
            4.2 生物被膜
            4.3 藥敏試驗(yàn)
            4.4 抗逆性
            4.5 細(xì)菌半數(shù)致死量 LD50

            4.6 細(xì)菌定殖能力
            4.7 組織病理學(xué)觀察
第三部分 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4047453

suoshi