為了能明確稻瘟病國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株race 007中包含的無毒基因及其可能的主效無毒基因,本研究設(shè)計(jì)5個(gè)常見的無毒基因特異性引物進(jìn)行克隆鑒定,并分別檢測(cè)液體培養(yǎng)條件下和侵染水稻過程中race 007菌株中5個(gè)無毒基因的表達(dá)情況。本研究發(fā)現(xiàn),稻瘟病菌株race 007中含有PWL2、AvrPiz-t、Avrpik、Avr-pita、ACE1 5個(gè)無毒基因,克隆鑒定的結(jié)果表明這5個(gè)無毒基因的變異不大。相比較于液體培養(yǎng)條件下,在侵染水稻的過程中,PWL2表達(dá)上調(diào),ACE1、AvrPiz-t、Avr-Pik表達(dá)基本不變,而Avr-Pita基因表達(dá)出現(xiàn)了下調(diào)。因此PWL2基因表達(dá)變化較為顯著,本研究進(jìn)一步對(duì)PWL2啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行分析,結(jié)果表明該P(yáng)WL2基因啟動(dòng)子區(qū)域存在著一些順式作用元件來影響PWL2基因的表達(dá)。本研究表明,稻瘟病菌race 007含有5種常見的無毒基因且序列變異不大,而且PWL2基因的表達(dá)是受到調(diào)控并可能發(fā)揮主要的致病作用。

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【部分圖文】：

圖3 無毒基因在race 007液體培養(yǎng)中的表達(dá)量分析

圖2第3、5、7天race007的菌絲形態(tài)（放大倍數(shù)10×10)2.3稻瘟病菌race007侵染水稻后無毒基因的表達(dá)量鑒定

圖4 早、中期水稻葉片侵染狀況(Bars=1 cm)

如圖4所示，稻瘟病病菌race007菌株侵染水稻后，在早期出現(xiàn)較小的菌斑，中期出現(xiàn)較明顯的病斑，侵染發(fā)展過程明顯。提取侵染日本晴水稻葉片早、中期的菌斑葉片的RNA，反轉(zhuǎn)成cDNA，用目的基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果如圖5。在隨著侵染時(shí)間的延長(zhǎng)，PWL2有比較明顯的表達(dá)上調(diào)，AC....

圖5 稻瘟病菌race 007侵染水稻后無毒基因的表達(dá)量鑒定

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明稻瘟病菌株race007中存在PWL2、AvrPiz-t、Avr-pik、Avr-pita、ACE15個(gè)無毒基因，因此本實(shí)驗(yàn)以這5個(gè)無毒基因作為研究對(duì)象進(jìn)行分析和討論。從這5個(gè)無毒基因的測(cè)序結(jié)果中，說明這5個(gè)無毒基因與已經(jīng)報(bào)道出來的無毒基因相似度較高，這也反....

圖2 第3、5、7天race 007的菌絲形態(tài)（放大倍數(shù)10×10)

如圖2所示，稻瘟病病菌race007菌株在液體培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)良好，因此提取液體培養(yǎng)第3、5、7天（分別為菌體生長(zhǎng)的早、中、晚期）的菌絲RNA，反轉(zhuǎn)成cDNA，用目的基因引物進(jìn)行熒光定量PCR分析，結(jié)果如圖3。結(jié)果表明，隨著液體培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，ACE1、Avr-Pita基因表達(dá)量....

本文編號(hào)：4015376