為了能明確稻瘟病國際標準菌株race 007中包含的無毒基因及其可能的主效無毒基因,本研究設計5個常見的無毒基因特異性引物進行克隆鑒定,并分別檢測液體培養(yǎng)條件下和侵染水稻過程中race 007菌株中5個無毒基因的表達情況。本研究發(fā)現(xiàn),稻瘟病菌株race 007中含有PWL2、AvrPiz-t、Avrpik、Avr-pita、ACE1 5個無毒基因,克隆鑒定的結果表明這5個無毒基因的變異不大。相比較于液體培養(yǎng)條件下,在侵染水稻的過程中,PWL2表達上調,ACE1、AvrPiz-t、Avr-Pik表達基本不變,而Avr-Pita基因表達出現(xiàn)了下調。因此PWL2基因表達變化較為顯著,本研究進一步對PWL2啟動子區(qū)域進行分析,結果表明該PWL2基因啟動子區(qū)域存在著一些順式作用元件來影響PWL2基因的表達。本研究表明,稻瘟病菌race 007含有5種常見的無毒基因且序列變異不大,而且PWL2基因的表達是受到調控并可能發(fā)揮主要的致病作用。

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圖3 無毒基因在race 007液體培養(yǎng)中的表達量分析

圖2第3、5、7天race007的菌絲形態(tài)（放大倍數(shù)10×10)2.3稻瘟病菌race007侵染水稻后無毒基因的表達量鑒定

圖4 早、中期水稻葉片侵染狀況(Bars=1 cm)

如圖4所示，稻瘟病病菌race007菌株侵染水稻后，在早期出現(xiàn)較小的菌斑，中期出現(xiàn)較明顯的病斑，侵染發(fā)展過程明顯。提取侵染日本晴水稻葉片早、中期的菌斑葉片的RNA，反轉成cDNA，用目的基因引物進行PCR擴增，結果如圖5。在隨著侵染時間的延長，PWL2有比較明顯的表達上調，AC....

圖5 稻瘟病菌race 007侵染水稻后無毒基因的表達量鑒定

本實驗研究結果表明稻瘟病菌株race007中存在PWL2、AvrPiz-t、Avr-pik、Avr-pita、ACE15個無毒基因，因此本實驗以這5個無毒基因作為研究對象進行分析和討論。從這5個無毒基因的測序結果中，說明這5個無毒基因與已經報道出來的無毒基因相似度較高，這也反....

圖2 第3、5、7天race 007的菌絲形態(tài)（放大倍數(shù)10×10)

如圖2所示，稻瘟病病菌race007菌株在液體培養(yǎng)條件下生長良好，因此提取液體培養(yǎng)第3、5、7天（分別為菌體生長的早、中、晚期）的菌絲RNA，反轉成cDNA，用目的基因引物進行熒光定量PCR分析，結果如圖3。結果表明，隨著液體培養(yǎng)時間的延長，ACE1、Avr-Pita基因表達量....

本文編號：4015376