現(xiàn)存最古老的脊椎動(dòng)物七鰓鰻是研究分子進(jìn)化和免疫調(diào)控的重要模式生物。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Factor,TRAF)和受體相互作用蛋白激酶(Receptor-Interacting Protein Kinase,RIPK)是哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)中重要的接頭分子,在TNFα、TLR和IFN信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用。鑒定七鰓鰻traf和ripk家族分子成員的種類、分析脊椎動(dòng)物traf和ripk家族的進(jìn)化過程以及研究接頭分子的功能,將對(duì)揭示脊椎動(dòng)物traf和ripk家族分子的進(jìn)化過程及探究七鰓鰻免疫相關(guān)的信號(hào)通路具有重要意義。1.本文利用生物信息學(xué)方法對(duì)海七鰓鰻(Petromyzon marinus)和雷氏七鰓鰻(Lethenteron reissneri)的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選,確定了七鰓鰻的4種TRAF分子和5種RIPK分子。通過對(duì)脊椎動(dòng)物TRAF和RIPK家族構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,預(yù)測(cè)其motif、結(jié)構(gòu)域組成,分析基因結(jié)構(gòu)及同線性基因,推測(cè)其起源和進(jìn)化關(guān)系。脊椎動(dòng)物TRAF家族的進(jìn)化是一種共選擇的進(jìn)化模式,即所有的T...

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞對(duì)照表
第1章 緒論
    1.1 TNFα通路簡(jiǎn)介
    1.2 traf基因家族的概述
        1.2.1 traf基因家族的結(jié)構(gòu)和分類
        1.2.2 TRAF蛋白家族的功能
    1.3 ripk基因家族的概述
        1.3.1 ripk基因家族的結(jié)構(gòu)和分類
        1.3.2 RIPK蛋白家族的功能
    1.4 本文研究現(xiàn)狀及其重要意義
第2章 脊椎動(dòng)物traf基因家族起源進(jìn)化分析
    2.1 生物信息學(xué)分析
        2.1.1 數(shù)據(jù)檢索及成員鑒定
        2.1.2 多序列比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.1.3 Motif預(yù)測(cè)
        2.1.4 基因結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
        2.1.5 同線性分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 L-traf基因家族成員鑒定
        2.2.2 脊椎動(dòng)物TRAF蛋白家族系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2.3 脊椎動(dòng)物TRAF蛋白家族Motif分析
        2.2.4 L-TRAF蛋白家族結(jié)構(gòu)域分析
        2.2.5 L-traf基因家族基因結(jié)構(gòu)分析
        2.2.6 L-traf基因家族同線性分析
    2.3 討論
第3章 脊椎動(dòng)物ripk基因家族起源進(jìn)化分析
    3.1 生物信息學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 L-ripk基因家族成員鑒定
        3.2.2 脊椎動(dòng)物RIPK蛋白家族系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.2.3 脊椎動(dòng)物蛋白家族Motif分析
        3.2.4 L-RIPK蛋白家族結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.5 L-ripk基因家族基因結(jié)構(gòu)分析
        3.2.6 L-ripk基因家族同線性分析
    3.3 討論
第4章 七鰓鰻traf和 ripk基因家族在各組織的分布及不同病原體刺激下的免疫應(yīng)答
    4.1 方法
        4.1.1 cDNA模板的制備
        4.1.2 實(shí)時(shí)定量PCR
        4.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)L-traf和 L-ripk基因家族的分布情況
        4.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)L-traf和 L-ripk基因家族應(yīng)答三種病原體刺激下表達(dá)情況
    4.3 討論
第5章 七鰓鰻TRAF3a、TRAF6和RIPK1a亞細(xì)胞定位及過表達(dá)對(duì)細(xì)胞的影響
    5.1 方法
        5.1.1 分子克隆及真核載體構(gòu)建
        5.1.2 免疫熒光
        5.1.3 免疫共沉淀
        5.1.4 雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
        5.1.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        5.1.6 Caspase8 的檢測(cè)
        5.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 pc DNA3.1-TRAF3a、pc DNA3.1-TRAF6和p EGFP-N1-RIPK1a真核載體構(gòu)建
        5.2.2 L-TRAF3a/6和L-RIPK1a定位于He La細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中且存在共定位
        5.2.3 L-TRAF3a/6與L-RIPK1a存在相互作用
        5.2.4 過表達(dá)L-TRAF3a、L-TRAF6和L-RIPK1a對(duì) NF-κB和ISRE的影響
        5.2.5 過表達(dá)L-TRAF3a、L-TRAF6和L-RIPK1a誘導(dǎo)He La細(xì)胞凋亡
        5.2.6 過表達(dá)L-TRAF3a、L-TRAF6和L-RIPK1a對(duì) caspase8 的影響
    5.3 討論
結(jié)論
本論文的創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄 A 實(shí)驗(yàn)試劑及設(shè)備
附錄 B 七鰓鰻traf和 ripk基因家族序列號(hào)
附錄 C 基于最大似然法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹
附錄 D L-RIPK1 同源序列比較
附錄 E q RT-PCR熔解曲線
附錄 F 質(zhì)粒圖譜
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝



本文編號(hào)：3991922