丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)體內(nèi)水溶性酚酸類物質(zhì)具有顯著的藥理活性并已成為目前研究熱點。植物體內(nèi)microRNAs(miRNAs)作為一類非編碼小分子RNA,廣泛參與生長、發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導及環(huán)境脅迫的調(diào)控,但miRNAs參與植物體內(nèi)次生代謝調(diào)控研究的報道較少。本研究前期通過Small RNA高通量測序獲得的1條丹參miR858(命名為Sm-miR858)序列為基礎,通過over-lapping PCR技術構(gòu)建了人工Sm-miR858前體(aSm-miR858)植物過表達載體(35S:aSm-miR858),并對丹參進行轉(zhuǎn)化,以分析丹參體內(nèi)Sm-miR858過表達后對酚酸類活性成分合成的影響,進而探索Sm-miR858在丹參體內(nèi)的生物學功能。實時定量PCR和RNA印跡結(jié)果顯示,在各陽性轉(zhuǎn)基因株系中,Sm-miR858均呈現(xiàn)不同程度過表達。同時,Sm-miR858的潛在靶標基因Sm-PAP1表達水平呈現(xiàn)相應不同程度的顯著下調(diào),且轉(zhuǎn)化株系中酚酸類活性成分含量均低于同期的野生型丹參。進一步檢測上述各丹參植株中酚酸類活性成分代謝途徑相關酶基因表達水平。結(jié)果顯示,酚酸類...

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 35S:Sm-miR858植物表達載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化
    1.3 DNA提取及轉(zhuǎn)基因丹參組培苗的基因組分子檢測
    1.4 RNA提取及cDNA的合成
    1.5 實時定量PCR(RT-qPCR)檢測基因的表達水平
    1.6 Southern印跡、Northern印跡和Small RNA Northern印跡檢測
        (1)Southern 印跡操作方法:
        (2)Northern 印跡操作方法:
        (3)Small RNA Northern 印跡操作方法:
    1.7 不同株系丹參體內(nèi)黃酮類及酚酸類物質(zhì)含量的測定
    1.8 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 Sm-miR858人工前體序列再生植物體內(nèi)整合性驗證結(jié)果
    2.2 轉(zhuǎn)基因丹參株系中Sm-miR858與SmPAP1的表達水平呈負相關
    2.3 Sm-miR858過表達轉(zhuǎn)基因丹參株系中酚酸類物質(zhì)含量呈顯著下降
    2.4 Sm-miR858的過表達導致轉(zhuǎn)基因丹參植株中酚酸類代謝途徑中相關酶基因表達水平下降
3 討論



本文編號：3943989