GRAS家族HAM亞家族基因是維持植物莖端分生組織(shoot apical meristem,SAM)未分化狀態(tài)的重要因子,并影響著植物的成花轉(zhuǎn)化進(jìn)程。該研究基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)HAM亞家族基因同源序列設(shè)計引物,利用RT-PCR技術(shù)從甘菊中克隆得到3個HAM類基因。序列分析結(jié)果表明,所克隆的3個基因開放閱讀框長度分別為1 845、1 479和1 881 bp,分別編碼614、492和626個氨基酸。Blastp分析顯示,3個基因的編碼蛋白均含有典型HAM亞家族蛋白特征,并與菊科植物黃花蒿(Artemisia annua)SCL6蛋白具有較高的一致性,分別達(dá)到了94.39%、91.90%和94.27%。進(jìn)一步分析表明,3個基因的編碼蛋白與所有擬南芥GRAS家族中的SCL6蛋白進(jìn)化關(guān)系最近,故將其分別命名為ClSCL6a、ClSCL6b和ClSCL6c。熒光定量分析顯示,3個ClSCL6基因均在甘菊莖中表達(dá)量最高,而在根和花中表達(dá)量普遍較低。在不同發(fā)育時期的花器官中,3個ClSCL6基因均有表達(dá),其中ClSCL6a在管狀花花粉...

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圖1不同發(fā)育時期的甘菊花

以甘菊葉片cDNA為模板,利用巢式PCR技術(shù)進(jìn)行SCL6同源基因的克隆。反應(yīng)體系如下:cDNA1μL,上下游引物各1μL,5×PrimesSTARBuffer(TaKaRa)4μL、PrimesSTAR(TaKaRa)0.1μL、dNTP(TaKaRa)1.....

圖2SCL6基因cDNA全長片段PCR擴(kuò)增

3個ClSCL6蛋白的二級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示,ClSCL6a和ClSCL6c蛋白的主要結(jié)構(gòu)為無規(guī)則卷曲,其次為α-螺旋;ClSCL6b蛋白α-螺旋與無規(guī)則卷曲含量差異不大。蛋白疏水性分析顯示3個ClSCL6蛋白整體均偏親水性,這與其他植物中SCL6疏水性特征類似[18]。三維結(jié)構(gòu)分....

圖3SCL6基因核苷酸及其推導(dǎo)的氨基酸序列

表23個ClSCL6基因及其編碼序列基本特征Table2BasiccharacteristicsofthreeClSCL6genesandtheircodingproducts基因名稱Genename基因長度Genelength/bp開放閱讀框O....

圖4不同物種基于SCL6同源蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹

圖3SCL6基因核苷酸及其推導(dǎo)的氨基酸序列構(gòu)建包括ClSCL6和全部擬南芥33個GRAS家族蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹,并以人類CSK蛋白作為外參。結(jié)果如圖5所示,ClSCL6與擬南芥SCL6、SCL22、SCL27等HAM亞家族蛋白緊密聚合在一起,進(jìn)一步表明ClSCL6為菊花中的SCL....

本文編號：3907805