日本沼蝦幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白(Macrobrachium nipponense Chitin Binding Proteins,MnCBPs)是構(gòu)成表皮的主要結(jié)構(gòu)性蛋白,其基因的表達(dá)與蛻皮周期關(guān)系緊密,由于CBPs間的相似性較低,且表皮不同的部位MnCBPs表達(dá)的時(shí)序性差異較大,提示:CBPs在蛻皮周期中的作用不盡相同。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),咪唑類物質(zhì)KK-42處理日本沼蝦幼蝦,能顯著縮短其蛻皮周期的時(shí)程。為了初步探究KK-42作用的分子機(jī)理,本文依據(jù)日本沼蝦表皮組織轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果,篩選出3條新的含有幾丁質(zhì)結(jié)合-4(chitin_bind₄)結(jié)構(gòu)域的MnCBPs,利用PCR技術(shù),從頭胸甲表皮組織中克隆到cDNA序列片段,測(cè)序長(zhǎng)度分別為362、431和1327 bp,按實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的先后順序命名為MnCBP-6(GenBank:KY126106)、MnCBP-7(GenBank:KY270879)和MnCBP-8(GenBank:MG818722)。生物信息學(xué)分析表明,3個(gè)MnCBPs均包含RR基序,與其他物種的多序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),MnCBP-6、MnCBP-...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖1-1甲殼動(dòng)物表皮結(jié)構(gòu)在蛻皮周期中的變化（引自Dillaman[19]

圖1-1甲殼動(dòng)物表皮結(jié)構(gòu)在蛻皮周期中的變化（引自Dillaman[19]等）A：蛻皮間期；B：蛻皮前早期，上皮細(xì)胞層與舊表皮脫離；C：蛻皮前晚期，新的上表皮層和外表皮層已經(jīng)在舊表皮下開(kāi)始形成；D：蛻皮；E：蛻皮后，內(nèi)表皮層開(kāi)始形成，直到蛻皮間期（A）表皮完全形成。Fig.....

圖3-1日本沼蝦總RNA電泳圖

第三章結(jié)果第三章結(jié)果蝦表皮組織總RNA的提取及cDNA第一鏈的獲isoPlus（TaKaRa）試劑盒從KK-42處理后0、3、6、12、24別提取處于C、D0-2、D3-4和A期的頭胸甲、尾扇、游泳足檢測(cè)其A260/A280比值在1.8~2.....

圖3-2MnCBP-6cDNA部分序列及預(yù)測(cè)的氨基酸序列

以頭胸甲cDNA為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增，得到三條CBPs基因片段，NCBI保守域檢索顯示，三條基因的氨基酸序列中都含有保守的幾丁質(zhì)結(jié)合-4結(jié)合域（chitin_bind_4）和RR基序（圖3-2，圖3-4，圖3-6），可以確定屬于CBPs基因。依據(jù)本實(shí)....

圖3-3MnCBP-6與其它物種表皮蛋白氨基酸序列比對(duì)黑色代表相同水平為100%，灰色代表相同水平≥50%，下同

圖3-3MnCBP-6與其它物種表皮蛋白氨基酸序列比對(duì)黑色代表相同水平為100%，灰色代表相同水平≥50%，下同。Fig.3-3ThealignmentofMnCBP-6withotherspeciesBlackindicatesthehomolo....

本文編號(hào)：3901378