太平洋鱈神經(jīng)壞死病毒(Pacific cod nervous necrosis virus,PCNNV)是太平洋鱈繁育過程中易感染并導(dǎo)致魚苗大量死亡的主要病毒。本研究從太平洋鱈中克隆獲得Fas和FasL基因,對其進行生物信息學(xué)分析、原核表達、亞細胞定位以及對EPC細胞系的效應(yīng)等研究,以期從FasL/Fas信號通路探索PCNNV暴發(fā)時太平洋鱈的免疫調(diào)節(jié)機制,為實現(xiàn)太平洋鱈的人工繁育提供理論依據(jù)。太平洋鱈FasL cDNA長1388 bp,5′UTR占315 bp,3′UTR占500 bp,ORF含有573 bp,ORF編碼190個氨基酸,預(yù)測的編碼蛋白含有一個較為保守的TNF家族同源結(jié)構(gòu)域(THD)。構(gòu)建了pET-32a-FasL原核表達載體,體外獲得蛋白分子量約為39 kDa的FasL重組蛋白,蛋白質(zhì)譜鑒定結(jié)果與預(yù)期氨基酸序列一致。MTT法檢測FasL重組蛋白對EPC細胞系的效應(yīng),結(jié)果顯示,高濃度的FasL重組蛋白可誘導(dǎo)EPC細胞大量死亡。Fas是FasL的受體,太平洋鱈Fas基因cDNA全長1975bp,5′UTR占106 bp,3′UTR占867 bp,ORF含有1002 bp,O...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

本文編號：3881347