青天葵是嶺南地區(qū)常用中藥材之一,具有潤肺止咳、清熱涼血、散瘀解毒的功效,臨床上多用于治療肺系疾病。青天葵藥材原植物為蘭科芋蘭屬植物毛唇芋蘭(Nervilia fordii(Hance)Schiltr.),該植物以無性生殖為主,對生長環(huán)境要求苛刻,每株每年一般只長1²個新球莖,每個球莖只長一片葉子。因此青天葵的繁殖系數(shù)非常低,加上人類的過度采挖,其野生資源瀕臨滅絕,而人工栽培還遠不能滿足市場需求。為了青天葵中藥資源的可持續(xù)利用,想方設法擴大其藥用資源迫在眉睫。獨腳金內酯(Strigolactones,SLs)是在2008年確認的一種具有萜內酯結構的新型植物激素,具有抑制植物分枝生長、促進側根形成、誘導根毛伸長、葉片衰老和控制中胚軸伸長的功能,在植物的生長發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。目前SLs的生物合成途徑已基本研究清楚,它是以類胡蘿卜素為底物,經(jīng)過類胡蘿卜素異構酶D27、類胡蘿卜素裂解雙加氧酶7、類胡蘿卜素裂解雙加氧酶8和細胞色素單加氧酶P450家族的CYP711A1等酶的作用逐步合成的。本課題組通過挖掘青天葵轉錄組數(shù)據(jù)找到了所有已報道的SLs通路的相關基因,說明S...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
    1 研究背景
    2 本論文工作開展的整體思路
        2.1 研究依據(jù)
        2.2 研究目的及意義
        2.3 研究內容與方法
        2.4 技術路線
第一章 文獻綜述
    1 青天葵研究進展
        1.1 栽培和組織培養(yǎng)研究
        1.2 化學成分研究
        1.3 藥理作用研究
        1.4 分子生物學研究
    2 獨腳金內酯研究進展
        2.1 獨腳金內酯的發(fā)現(xiàn)
        2.2 獨腳金內酯的生物合成
        2.3 獨腳金內酯的信號轉導
        2.4 獨腳金內酯的生物學作用
    3 展望
第二章 青天葵獨腳金內酯合成相關基因NfCCD7的克隆
    1 實驗材料與試劑
        1.1 植物材料
        1.2 試劑
        1.3 菌種及載體
        1.4 培養(yǎng)基與抗生素
        1.5 儀器設備
        1.6 引物與測序
    2 實驗方法
        2.1 青天葵轉錄組Unigenes的篩選
        2.2 青天葵葉片總RNA的提取
        2.3 總RNA的質量檢測
        2.4 總RNA第一鏈cDNA的合成
        2.5 青天葵NfCCD7的擴增
        2.6 青天葵NfCCD7cDNA全長的拼接
        2.7 青天葵NfCCD7編碼區(qū)的擴增
        2.8 基因編碼蛋白的分析
    3 結果與分析
        3.1 青天葵轉錄組Unigenes的篩選
        3.2 青天葵葉片總RNA提取
        3.3 青天葵NfCCD7cDNA全長序列的獲得
        3.4 NfCCD7編碼區(qū)擴增
        3.5 青天葵NfCCD7基因編碼蛋白的分析
    4 討論
第三章 NfCCD7/EGFP融合基因在煙草原生質體中的瞬時表達
    1 實驗材料與試劑
        1.1 植物材料
        1.2 試劑
        1.3 菌種及載體
        1.4 培養(yǎng)基與抗生素
        1.5 溶液配制
        1.6 儀器設備
    2 實驗方法
        2.1 融合基因表達載體的構建
        2.2 煙草原生質體的提取
        2.3 PEG介導融合基因瞬時表達
    3 結果與分析
        3.1 融合基因表達載體的構建
        3.2 融合基因的瞬時表達
    4 討論
第四章 農桿菌介導NfCCD7轉化擬南芥的初步探索
    1 實驗材料與試劑
        1.1 植物材料
        1.2 試劑
        1.3 菌種及載體
        1.4 培養(yǎng)基與抗生素
        1.5 溶液配制
        1.6 儀器設備
    2 實驗方法
        2.1 表達載體pRI101AN-NfCCD7的構建
        2.2 凍融法轉化農桿菌
        2.3 農桿菌浸染擬南芥
    3 結果與分析
        3.1 NfCCD7目的片段的擴增
        3.2 載體的構建
        3.3 擬南芥轉基因植株的篩選
    4 討論
結語
    1 結論
        1.1 從轉錄組數(shù)據(jù)庫中篩選獲得了目的Unigenes片段
        1.2 克隆得到了NfCCD7cDNA全長序列
        1.3 克隆所得基因編碼的NfCCD7蛋白定位于細胞的葉綠體中
        1.4 獲得了T₁代轉基因擬南芥苗和種子
    2 展望
        2.1 遺傳轉化研究
        2.2 NfCCD7的時空表達
        2.3 NfCCD7的蛋白功能研究
參考文獻
附錄
    附錄1：Prime Script^TMⅡ1^st Stand cDNA Synthesis Kit說明書
    附錄2：DNA純化回收試劑盒說明書
    附錄3：pLB零背景快速克隆試劑盒說明書
    附錄4：SMARTer?RACE5’/3’Kit說明書
    附錄5：ClonExpress?MultiS One Step Cloning Kit說明書
    附錄6：StarPure柱式超純質粒大提試劑盒說明書
    附錄7：植物表達載體pRI101AN-DNA圖譜信息
    附錄8：Phire Plant Direct PCR Master Mix試劑盒說明書
    附錄9：英文縮略語
碩士期間發(fā)表的論文
致謝
統(tǒng)計學審核證明



本文編號：3820798