伴隨著我國沿海城市工業(yè)化不斷推進(jìn),日常生活廢物持續(xù)污染,近海養(yǎng)殖業(yè)遭受了越來越頻繁的病菌侵害,多種海洋經(jīng)濟(jì)物種生存環(huán)境愈發(fā)嚴(yán)峻。厚殼貽貝(Mytilus coruscus)是我國東南沿海各省的養(yǎng)殖貝類之一,由于成年個(gè)體底棲固著的濾食性生活方式,成為了眾多海洋病原菌的理想宿主,而海洋弧菌就是其中一大主要病原菌。先天免疫在厚殼貽貝免疫系統(tǒng)中占據(jù)重要地位,而Toll樣受體是先天免疫中的一環(huán)。因此,本實(shí)驗(yàn)以厚殼貽貝Toll樣受體為研究對象,通過同源克隆法及RACE技術(shù)得到厚殼貽貝Toll樣受體i(McTLR-i)的cDNA全長以及溶菌酶cDNA序列McLYZ,采用熒光定量PCR(real-time fluorescence quantification,RT-qPCR)初步探究McTLR-i、參與TLR/NF-kB通路的接頭分子和McLYZ的相對表達(dá)趨勢是否存在聯(lián)系,主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)McTLR-i cDNA序列全長為2821bp,其中包含2022bp的開放閱讀框,編碼673個(gè)氨基酸,結(jié)構(gòu)域分析顯示其與軟體動(dòng)物的mccTLRs較為相似。McTLR-i與地中海貽貝(Mytilus gall...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 Toll樣受體結(jié)構(gòu)、分類及相關(guān)配體
        1.1.1 Toll樣受體結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.1.2 Toll樣受體的分類
        1.1.3 Toll樣受體的常見配體
    1.2 Toll樣受體的相關(guān)通路
    1.3 海洋無脊椎動(dòng)物Toll樣受體的研究進(jìn)展
    1.4 本研究目的和意義
第二章 Mc TLR-i的基因克隆與序列分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 厚殼貽貝RNA的提取與檢測
        2.2.2 McTLR-i cDNA全長擴(kuò)增
        2.2.3 Mc TLR-i cDNA全長特征
        2.2.4 McTLR-i氨基酸序列多序比對
        2.2.5 McTLR-i系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.3 討論
第三章 Mc TLR-i的基因表達(dá)調(diào)控分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)生物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 Mc TLR-i組織差異性表達(dá)分析
        3.2.2 弧菌脅迫下Mc TLR-i基因的時(shí)序性表達(dá)
        3.2.3 TLR/NF-κB通路蛋白基因時(shí)序性表達(dá)
    3.3 討論
第四章 McLYZ的基因克隆與序列分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 厚殼貽貝總RNA的提取與檢測
        4.2.2 Mc LYZ cDNA序列特征
        4.2.3 McLYZ多序列比對分析
        4.2.4 McLYZ氨基酸序列分子特性預(yù)測
        4.2.5 McLYZ系統(tǒng)進(jìn)化分析
        4.2.6 McLYZ蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    4.3 討論
第五章 McLYZ的基因表達(dá)調(diào)控分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)生物
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 McLYZ組織差異性表達(dá)分析
        5.2.2 菌脅迫下McLYZ基因的時(shí)序性表達(dá)
    5.3 討論
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果



本文編號：3789778