柑橘是世界第一大水果,擁有龐大的栽培面積和豐富的品種資源。珠心胚是柑橘重要的生殖性狀,由珠心組織侵入胚囊發(fā)育而來,它阻礙了柑橘的系統(tǒng)性雜交選育,但在砧木利用、品種復(fù)壯等方面具有十分積極的意義,對遺傳進(jìn)化和柑橘分類學(xué)研究也具有重要影響。若將此無融合生殖性狀導(dǎo)入水稻、玉米等作物當(dāng)中,將極大地簡化育種程序,給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來巨大變革。柑橘珠心胚的遺傳調(diào)控已有眾多研究報道,但都沒能落到真實(shí)的調(diào)控序列上,直到候選基因CitRWP的報道,但相關(guān)研究仍缺乏充足的證據(jù),未能完全證實(shí)CitRWP對柑橘珠心胚的調(diào)控。本研究利用本實(shí)驗(yàn)室收集的芽變單胚甜橙、枳及其雜交分離后代以及其它單多胚材料,從基因組分子標(biāo)記,基因表達(dá)檢測,cDNA克隆測序三個層面對CitRWP基因進(jìn)行分析,此外,還利用塔羅科血橙的CitRWP基因表達(dá)序列構(gòu)建了超表達(dá)載體,對煙草進(jìn)行轉(zhuǎn)化,以綜合探討CitRWP的基因功能。1、基因組M/P分子標(biāo)記驗(yàn)證M/P分子標(biāo)記是Shimada等根據(jù)CitRWP基因啟動子區(qū)的MITE轉(zhuǎn)座子狀況而開發(fā)的珠心胚鑒定標(biāo)記,在其分析的眾多柑橘材料中,標(biāo)記與珠心胚具有很好的一致性,用該標(biāo)記檢測我們的研究材料后,發(fā)現(xiàn)該標(biāo)...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 無融合生殖現(xiàn)象與意義
    1.2 配子體無融合生殖
        1.2.1 MIME突變體的研究背景
        1.2.2 MIME突變體的產(chǎn)生
        1.2.3 MIME在作物無融合生殖中的應(yīng)用
    1.3 孢子體無融合生殖
        1.3.1 柑橘珠心胚現(xiàn)象
        1.3.2 柑橘珠心胚的遺傳學(xué)研究
        1.3.3 柑橘珠心胚的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究
第2章 引言
第3章 材料與方法
    3.1 基因組分子標(biāo)記檢測
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)試劑與儀器
        3.1.3 DNA提取與分子標(biāo)記檢測
    3.2 基因表達(dá)檢測
        3.2.1 試驗(yàn)材料
        3.2.2 試驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.3 RNA的提取與c DNA的反轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 實(shí)時熒光定量PCR檢測
    3.3 cDNA克隆測序
        3.3.1 試驗(yàn)材料
        3.3.2 試驗(yàn)試劑與儀器
        3.3.3 克隆目的基因
        3.3.4 轉(zhuǎn)化大腸桿菌
    3.4 Cit RWP超表達(dá)
        3.4.1 試驗(yàn)材料
        3.4.2 試驗(yàn)試劑與儀器
        3.4.3 構(gòu)建超表達(dá)載體
        3.4.4 超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.4.5 超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化煙草
        3.4.6 陽性轉(zhuǎn)基因煙草篩選
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 基因組分子標(biāo)記檢測
    4.2 Cit RWP基因表達(dá)檢測
    4.3 Cit RWP的 c DNA克隆測序
    4.4 Cit RWP超表達(dá)
        4.4.1 Cit RWP的超表達(dá)載體構(gòu)建
        4.4.2 轉(zhuǎn)基因煙草的PCR鑒定
        4.4.3 轉(zhuǎn)基因Cit RWP對煙草植株表型的影響
第5章 討論
    5.1 RWP基因家族的功能與序列變異
    5.2 性狀遺傳調(diào)控研究需多層面的協(xié)同
    5.3 柑橘珠心胚調(diào)控研究的難點(diǎn)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
發(fā)表文章及參研項(xiàng)目



本文編號：3786347