瘧疾（Malaria）是全球三大傳染病之一,每年仍有40萬以上的人口因瘧疾死亡。瘧疾的病原體瘧原蟲有十分復雜的生活史,在雌性按蚊（Anopheles）和脊椎動物之間交替發(fā)生有性生殖與無性生殖。在不同發(fā)育階段中復雜的基因表達調(diào)控是瘧原蟲適應不同宿主環(huán)境的關(guān)鍵。瘧原蟲的基因表達調(diào)控受轉(zhuǎn)錄因子、啟動子、增強子、非編碼RNA和表觀遺傳學等因素調(diào)控。本課題組之前在約氏瘧原蟲（Plasmodium yoelii）的研究中發(fā)現(xiàn)300多個5’或3’非翻譯區(qū)（untranslated region,UTR）內(nèi)含子,但UTR內(nèi)含子對瘧原蟲基因表達的影響與功能尚未研究。本研究中,我們構(gòu)建了雙熒光素酶報告基因質(zhì)粒,選擇約氏瘧原蟲5’UTR部分只含單一內(nèi)含子的四個基因,通過電擊穿孔將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到約氏瘧原蟲17XL中,利用熒光素酶報告基因分析包含和不包含內(nèi)含子的5’UTR活性。我們發(fā)現(xiàn)其中三個基因,包含5’UTR內(nèi)含子質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)蟲株表達量約為不包含5’UTR內(nèi)含子質(zhì)粒的1-3倍,這一結(jié)果表明5’UTR內(nèi)含子可以增加約氏瘧原蟲的基因表達。我們在不同亞型的約氏瘧原蟲蟲株中發(fā)現(xiàn)了一致的結(jié)果,通過電擊轉(zhuǎn)染編碼可調(diào)控翻譯腫瘤... 

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 瘧疾
        1.1.1 瘧疾發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.2 瘧原蟲及其生活史
        1.1.3 疾病防治
    1.2 基因表達調(diào)控
        1.2.1 5'UTR對基因表達調(diào)控的影響
        1.2.2 內(nèi)含子影響基因表達調(diào)控的研究進展
        1.2.3 瘧原蟲的基因表達調(diào)控
    1.3 TCTP蛋白
    1.4 研究目的與意義
第二章 5'UTR內(nèi)含子對約氏瘧原蟲基因表達的影響
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 瘧原蟲蟲株及實驗小鼠
        2.2.2 實驗試劑配制
        2.2.3 主要儀器設備
        2.2.4 雙熒光素酶報告基因質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        2.2.5 電擊轉(zhuǎn)染
        2.2.6 電轉(zhuǎn)蟲株鑒定
        2.2.7 熒光素酶表達量的測定
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 雙熒光素酶報告基因質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.2 5'UTR內(nèi)含子對不同基因表達的影響
        2.3.3 5'UTR內(nèi)含子對不同蟲株基因表達的影響
        2.3.4 5'UTR內(nèi)含子大小與序列對基因表達的影響
    2.4 討論
第三章 Pytctp 5'UTR內(nèi)含子對基因表達的作用與功能
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗試劑配制
        3.2.2 主要儀器設備
        3.2.3 質(zhì)粒構(gòu)建
        3.2.4 電擊轉(zhuǎn)染及藥物處理
        3.2.5 免疫熒光分析
        3.2.6 蛋白提取及免疫印跡
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 質(zhì)粒構(gòu)建與電擊轉(zhuǎn)染蟲株鑒定
        3.3.2 插入3×HA標簽對瘧原蟲生長情況的影響
        3.3.3 5'UTR內(nèi)含子對蛋白表達影響的分析
        3.3.4 敲除5'UTR內(nèi)含子對瘧原蟲生長情況的影響
    3.4 討論
第四章 小結(jié)
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2017年全國消除瘧疾進展及疫情特征分析[J]. 張麗,豐俊,張少森,夏志貴,周水森.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2018(03)
[2]我國瘧疾防治研究成就[J]. 湯林華.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 1999(05)



本文編號：3691370