目的:探討GTP結(jié)合蛋白4 （GTPBP4）基因介導(dǎo)EGFR/PI3K/AKT信號通路對順鉑誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控機制。方法:選取人胃癌細(xì)胞株MGC-803、NCI-N87、SGC-7901、MKN-45及人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1,篩選癌細(xì)胞中GTPBP4表達最高的細(xì)胞株并分為6組:Blank組（胃癌細(xì)胞不做處理）、陰性對照組（轉(zhuǎn)染含有無關(guān)序列的重組質(zhì)粒）、GTPBP4 shRNA組（轉(zhuǎn)染含有GTPBP4 shRNA的重組質(zhì)粒）、GTPBP4過表達組（轉(zhuǎn)染含有GTPBP4片段的重組質(zhì)粒）、EGFR/PI3K/AKT inhibitor組（EGFR/PI3K/AKT通路抑制劑處理細(xì)胞）、Combined treatment組（EGFR/PI3K/AKT通路抑制劑聯(lián)合GTPBP4 shRNA處理細(xì)胞）,分別給予順鉑處理。qRT-PCR和Western blot檢測EGFR/PI3K/AKT信號通路和凋亡相關(guān)基因的mRNA和蛋白表達水平。MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖活力。Transwell檢測各組細(xì)胞侵襲情況。流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:與人胃黏膜上皮細(xì)胞相比,胃癌細(xì)胞株中GT... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 GTPBP4基因沉默及過表達重組質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及分組轉(zhuǎn)染
        1.2.3 半數(shù)抑制濃度(IC50)測定
        1.2.4 qRT-PCR檢測基因相對表達水平
        1.2.5 Western blot檢測蛋白相對表達
        1.2.6 MTT法測定細(xì)胞增殖活力
        1.2.7 Transwell細(xì)胞侵襲實驗
        1.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 GTPBP4在胃癌細(xì)胞中的表達情況
    2.2 MKN-45細(xì)胞株順鉑誘導(dǎo)濃度確定
    2.3 順鉑下調(diào)胃癌細(xì)胞GTPBP4表達
    2.4 GTPBP4基因沉默抑制EGFR/PI3K/AKT信號通路激活
    2.5 GTPBP4基因沉默
    2.6 GTPBP4基因沉默介導(dǎo)EGFR/PI3K/AKT信號通路抑制胃癌細(xì)胞侵襲
    2.7 GTPBP4沉默可抑制EGFR/PI3K/AKT信號通路引起順鉑誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3680635