目的 原核表達(dá)古爾圖病毒（Guertu virus, GTV）糖蛋白截短片段（Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2）,分別純化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重組蛋白并制備其多克隆抗體。方法 采用RT-PCR的方法分別擴(kuò)增得到GTV DXM毒株截短糖蛋白Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2基因片段,并將其構(gòu)建到原核表達(dá)載體pET-32a（＋）中,繼而轉(zhuǎn)化到E.coli BL21（DE3）中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE分析蛋白質(zhì)大小。經(jīng)鎳柱親和層析純化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重組蛋白,用GTV陽(yáng)性羊血清通過(guò)Western blot法檢測(cè)重組蛋白的抗原性。用純化的蛋白質(zhì)分別免疫新西蘭白兔制備抗血清,ELISA法檢測(cè)血清效價(jià)。將構(gòu)建的真核表達(dá)載體pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2轉(zhuǎn)染至哺乳動(dòng)物Vero細(xì)胞,并用間接免疫熒光法評(píng)估前述制備的兔多克隆抗體的結(jié)合活性。最后用Western blot法檢測(cè)血清與重組蛋白的特異性反應(yīng)能力。結(jié)果 雙酶切鑒定和測(cè)序結(jié)果表明pET-32a-Gn、pET-32a-Gn1/Gn2/Gn3、p... 

【文章頁(yè)數(shù)】： 頁(yè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新疆出血熱病毒糖蛋白Gc不同區(qū)段抗原DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠的免疫應(yīng)答[J]. 汪梅芳,郭超凡,朱華兵,陳麗娟,張渝疆,孫素榮.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2017 (06)
[2]新疆出血熱病毒截短糖蛋白的原核表達(dá)及抗體制備[J]. 俞歡,汪梅芳,張渝疆,彭倩,寇春,達(dá)爾肯·托肯,李陽(yáng),李軼杰,孫素榮.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2015 (05)
[3]中東呼吸綜合征冠狀病毒N蛋白的原核表達(dá)、純化和鑒定[J]. 王延群,郝春緒,鄧瑤,楊揚(yáng),趙莉,沈曉玲,譚文杰.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2014 (10)
[4]新疆出血熱病毒核蛋白多克隆抗體的制備及其免疫學(xué)評(píng)價(jià)[J]. 劉東亮,李陽(yáng),趙晶,吳婷,孫素榮.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2013(08)
[5]三株克里米亞剛果出血熱病毒中國(guó)分離株糖蛋白基因的全序列測(cè)定與比較分析[J]. 馬本江,杭長(zhǎng)壽,Papa Anna,唐青,Antoniadis Antonis.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2001(02)



本文編號(hào)：3673733